PCR-RFLP HLA结果分析

参照限制性核酸内切酶酶切位点在HLA等位基因DNA序列上的分布情况,根据样本的PCR-RFLP结果,对样本的HLA基因型别进行判断。由于篇幅限制,仅介绍DR1纯合子亚型的鉴定作为说明。

DR1纯合子样本各种等位基因的PCR-RFLP带型:

DR1等位基因组合 限制性核酸内切酶
Ava II Pst I
0101/0101 1 1
0102/0102 1 0
0103/0103 0 1
0101/0102 1 2
0101/0103 2 1
0102/0103 2 2

0:无酶切位点; 1:一个酶切位点; 2:2个酶切位点(杂合子)

注意事项和经验总结:

1. 上述介绍的分型方法是用于HLA-DRB1高分辨率分型的PCR-RFLP技术,即已知DR型别样本的亚型鉴定,如果用该方法进行HLA-DR杂合子的亚型鉴定,其RFLP带型十分复杂,通常需要借助于计算机软件进行结果判断。

如果进行其他HLA基因或者中分辨率分型,虽然操作过程类似,但必须改变实验条件(包括引物、扩增条件、限制性核酸内切酶的选用、结果解释等)。

2. 用限制性核酸内切酶酶切PCR扩增产物时,可能出现酶切不完全,造成结果分析困难和错误。应采用相应核酸内切酶识别位点阳性的DNA作为对照,及时发现其中的问题并予以解决。

3. 凝胶电泳时使用的DNA染料(如溴化乙锭等)是致突变剂,操作时应戴手套,并注意在规定的范围内操作,废液或废物应妥善处理。

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