PAGE胶上蛋白质的银染方法

PAGE胶上蛋白质的银染方法有数百种,其原理相似,具体步骤各不相同。银染为蛋白质的非特异性染色,呈“爆炸性”反应模式,用于蛋白定量时准确性差,但其敏感度高、简便易行,仍被广泛应用。下面列举的这三种方法为常用的双向电泳凝胶染色法,可与质谱兼容。其中方法1敏感性最高,方法3背景最低、对比度好。

1.Blam silver staining protocol (Modified)

程序溶液时间
固定 40%ETOH 10%HAC 1小时
漂洗 30%ETOH 2×20min
致敏 0.02%Na2S2O3 1min
漂洗 H2O 3×20Secs
染色 0.1%AgO3(预冷) 4℃,20mins
漂洗 H2O H2O(更换盘子) 3×20Secs 1min
显色 3%Na2CO3 0.05%甲醛
漂洗 H2O 20Secs
中止 5%Hac
漂洗 H2O 3×10min
贮存 1%Hac,4℃

2.EMBL Silver Staining Protocol

程序溶液时间
固定 50%MeOH 5%HAc 20min
漂洗 H2O 2hr或过夜
致敏 0.02%Na2S2O3 1min
漂洗 H2O 2×1min
染色 0.1%AgO3(预冷) 20mins
漂洗 H2O 2×1min
显色 2%Na2CO3 0.04%甲醛
中止 5%Hac
漂洗 H2O 3×10min
贮存 1%Hac,4℃

3.Vorum Silver Staining Protocol

程序溶液时间
固定 50%MeOH 12%HAC 0.05%甲醛 2hr或过夜
漂洗 35%ETOH 3×20min
致敏 0.02%Na2S2O3 2min
漂洗 H2O 3×5mins
染色 0.2AgNO3 0.076%甲醛 20mins
漂洗 H2O 3×5mins
显色 3%Na2CO3 0.05%甲醛 0.0004% Na2S2O3 5mins
中止 50%MeOH 12%HAc
贮存 1%Hac,4℃

注意事项:

1.应严格按照操作步骤进行;

2.显色前最好更换新染色盘;

3.显色时变为黄色或棕色后立即弃去,更换新鲜显色液,一般来说染一块胶应配制500ml染液。更换2-3次;

4.市售甲醛的浓度为37%;

5.三种方法均与质谱兼容,Blum法敏感性高,但背景呈淡黄色,EMBL法次之但背景较低,染色点较黑。Vorum相对不敏感,但背景清晰,信噪比高

内容来源:生物资料网,如果侵权麻烦联系网站工作人员删除!

艾美捷科技优势代理品牌

发表评论

:?: :razz: :sad: :evil: :!: :smile: :oops: :grin: :eek: :shock: :???: :cool: :lol: :mad: :twisted: :roll: :wink: :idea: :arrow: :neutral: :cry: :mrgreen: