农杆菌介导的小麦新鲜离体幼胚的转化实验-幼胚的接种

材料与仪器

幼胚盾片Silwet 农杆菌菌液培养皿

步骤

1. 幼胚盾片接种于侵染培养基后,从摇床上取出一管菌液(见注 9),向管中加入 60 μl 1%(V/V)的 Silwet,至终浓度为 0.015%。2. 完成 3.2 节的步骤 3 后,立即将离心管中所有的农杆菌菌液(4 ml) 倒入已接种幼胚盾片的培养皿中 [见注 10,图 5.1 (a )]。

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3. 将培养皿转移至黑暗条件下放置 15 min 至 3 h ( 见注 11)。在此期间可以进行其他培养皿的农杆菌菌液侵染操作。4. 吸去多余的农杆菌悬液 [ 图 5.1 (b) ] ,应注意不要吸到胚(见注 12)。将胚转移至含固体接种培养基的新培养皿中,接种时盾片向上,胚轴面需接触到培养基。5. 将共培养培养板置于 22~23℃ 暗培养 2~3 天。

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