脲酶的测定实验-光度计测定法

材料与仪器

脲酶磷酸钾 脲 ADP NADH α-酮戊二酸 谷氨酸脱氢酶 脲酶分光光度计

步骤

实验所需「试剂」具体见「其他」

0.98 ml 实验混合物

0.02 ml 脲酶

25℃、340 nm 处吸收值降低,ε340=6.3×103l/(mol·cm)。

常见问题

试剂:

0.1 mol/L 磷酸钾,pH 7.6

2.0 mol/L 脲(Mr=60.0;12 g 溶于 100 ml 0.1 mol/L 磷酸钾,pH 7.6)

25 mmol/L ADP(二钠盐,Mr=471.2;118 mg 溶于 10 ml 0.1 mol/L 磷酸钾,pH 7.6)

10 mmol/L NADH(二钠盐,Mr=709.4;71 mg 溶于 10 ml 0.1 mol/L 磷酸钾,pH7.6)

0.1 mol/L α-酮戊二酸(单钠盐,Mr=168.1;168 mg 溶于 10 ml 0.1 mol/L 磷酸钾,pH 7.6)来源于牛肝脏的谷氨酸脱氢酶(GluDH,500 U/ml 在 0.1 mol/L 磷酸钾中,pH 7.6)

脲酶(大约 1 mg/ml,使用前用 0.1 mol/L 磷酸钾、pH 7.6 溶液稀释至约 0.1 U/ml)

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