耐药细胞株构建详细步骤步骤

1、细胞复苏

(1)将ddH2O预温至37℃。

(2)戴上手套和口罩帽子,从液氮罐中取出装有目的细胞的冻存管(内有1 mL细胞混合液),立即投入37ddH2O中,轻摇冻存管使之在1分钟内快速溶解。

(3)完全溶解后,75%酒精擦拭冻存管外壁消毒后带进超净台。

(4)在超净台中,在15 mL灭菌离心管中预先加入10 mL新鲜配制的培养基,打开冻存管,将所有冻融的细胞悬液加入该离心管中,常温1000 rpm离心3分钟,吸除上层的培养液。

(5)1mL培养基重悬细胞沉淀,轻轻吹打混匀后加入T25细胞培养瓶中,补足培养基至5 mL,置于37℃、5%CO2培养箱培养。

(6)48小时后换液,细胞融合接近80%时即可传代。

2、细胞给药+培养

HSC-3细胞用含10%胎牛血清、1%双抗的DMEM培养基,在37℃饱和湿度、含5%CO2的培养箱中培养。

3、细胞处理

向细胞中加入10.36μg/mL阿帕替尼进行处理,至筛选出可以在含有10.36μg/mL阿帕替尼的培养基中稳定传代的细胞。

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