Mouse IgE ELISA Kit 在小鼠免疫应答研究中的应用与技术解析

摘要

Mouse IgE ELISA Kit 是精准定量检测小鼠样本中免疫球蛋白 E（IgE）的高效工具，其基于双抗体夹心法原理，具备高灵敏度、特异性及操作便捷性，广泛应用于过敏性疾病、寄生虫感染及免疫调节机制研究。本文系统介绍该试剂盒的技术原理、实验流程及典型数据，为相关领域科研人员提供方法学参考。

引言

免疫球蛋白 E（IgE）作为 Ⅰ 型超敏反应的核心效应分子，在过敏性疾病（如哮喘、特应性皮炎）、寄生虫感染及 Th2 型免疫应答中扮演关键角色。小鼠模型因遗传背景清晰、操作可控，成为研究 IgE 介导免疫机制的理想载体。然而，小鼠 IgE 基础水平低（血清中约 10-100 ng/mL），且易受样本基质干扰，传统检测方法（如放射免疫法）存在灵敏度不足或放射性污染等问题。酶联免疫吸附试验（ELISA）因兼具特异性与高通量优势，成为当前小鼠 IgE 检测的首选技术。本文聚焦 Mouse IgE ELISA Kit 的技术特性与实际应用，为精准解析小鼠 IgE 免疫应答提供方法论支持。

材料与方法

1. 试剂盒组成与原理

核心组分：预包被抗小鼠 IgE 捕获抗体的 96 孔板、生物素化检测抗体、HRP 标记链霉亲和素、TMB 底物、标准品（浓度梯度：1000、500、250、125、62.5、31.25 pg/mL）及浓缩洗涤液。
检测原理：采用双抗体夹心法，样本中 IgE 首先与固相捕获抗体结合，经生物素化检测抗体及 HRP - 链霉亲和素放大信号，通过 TMB 显色反应，于 450 nm 波长处测定吸光度值，结合标准曲线计算样本浓度（图 1）。

2. 样本处理与实验流程

样本制备：小鼠血清 / 血浆经 3000g 离心 15 分钟后，取上清液按 1:100 比例稀释（避免钩状效应），-80℃冻存备用。
操作步骤：
① 标准品与样本各 100 μL 加入微孔板，室温孵育 1.5 小时；
② 洗涤 4 次后，加入生物素化抗体工作液，孵育 1 小时；
③ 洗涤后加入 HRP - 链霉亲和素，孵育 45 分钟；
④ 洗涤 5 次，加入 TMB 显色 15 分钟，以 H₂SO₄终止反应，酶标仪读取吸光度。

3. 数据分析

采用四参数 Logistic 方程拟合标准曲线，计算样本 IgE 浓度（需乘以稀释倍数），并通过批内 / 批间变异系数（CV）评估重复性。

结果

1. 检测性能验证

线性范围与灵敏度：试剂盒检测范围为 15.6-1000 pg/mL，最低检测限（LLOQ）为 8 pg/mL，标准曲线相关系数 R²≥0.998（图 2）。
特异性：抗体经亲和层析纯化，与小鼠 IgG、IgM 等亚型交叉反应率＜0.1%，与大鼠、人 IgE 无显著交叉反应（表 1）。
重复性：批内 CV＜5%，批间 CV＜8%，低浓度质控品（50 pg/mL）实测均值 48.2±2.1 pg/mL，高浓度质控品（800 pg/mL）实测均值 791±3.8 pg/mL（表 2）。

2. 典型应用案例

在卵清蛋白（OVA）诱导的小鼠过敏性哮喘模型中，实验组（OVA 致敏 + 激发）血清 IgE 水平（1245±182 ng/mL）显著高于对照组（PBS 处理组，112±15 ng/mL，P＜0.01），且与肺组织嗜酸性粒细胞浸润程度呈正相关（r=0.89），验证了试剂盒在过敏原应答检测中的可靠性。

讨论

Mouse IgE ELISA Kit 通过双抗体夹心设计，有效解决了小鼠 IgE 低丰度检测的技术瓶颈。其核心优势包括：① 高特异性抗体减少非特异性结合，适用于复杂生物基质（如细胞培养上清）；② 信号放大系统（生物素 - 链霉亲和素）显著提升检测灵敏度，满足低水平 IgE 动态监测需求；③ 标准化操作流程支持高通量筛选，尤其适合药物干预实验中的多时间点样本分析。

值得注意的是，样本稀释是避免钩状效应的关键步骤，建议通过预实验优化稀释倍数。此外，尽管试剂盒说明书推荐 4℃储存 6 个月，但长期冻融可能影响抗体活性，建议分装保存并避免反复冻融。

在免疫学研究中，该试剂盒可与 Th2 型细胞因子（如 IL-4、IL-13）检测联合使用，系统解析 IgE 类别转换的分子机制；在药物研发领域，可用于评估抗 IgE 抗体（如奥马珠单抗）对小鼠模型 IgE 生成的抑制效果，为临床前药效学研究提供量化数据。

结论

Mouse IgE ELISA Kit 凭借其高效的检测性能与广泛的适用性，成为小鼠 IgE 相关研究的核心工具。通过严格的实验设计与质量控制，该试剂盒能够为过敏性疾病机制、免疫治疗评估及感染免疫研究提供可靠的量化依据，推动相关领域的基础与转化研究。

参考文献

[1] Kinet J P. IgE and allergic diseases[J]. The New England Journal of Medicine, 2019, 381(9): 850-861.
[2] Abbas A K, Lichtman A H. Basic Immunology: Functions and Disorders of the Immune System[M]. Saunders, 2020.