1、细胞核干扰:细胞核位置前面的细胞质染色干扰造成,可以降低抗体浓度,孵育时间
2、细胞或者组织状态不对:细胞或者组织状态不同导致你的目的蛋白细胞定位不同,造成最后的定位不对,如果一直出现定位不对问题,建议重新培养细胞调整好状态或者重新取材,进行再次染色。
3、共定位问题解析:假设想证明某一细胞发生某种变化,换句话说就是既有某种蛋白表达,又有另一种蛋白表达,两种蛋白属于共定位,该种情况可以采用免疫双标记检测;如果两种蛋白不属于共定位,假设一种在膜上表达,一种在胞浆表达,该种情况应该不属于共定位,属于共表达,这时候实验应该重新设计去验证你的结论。
4、核定位不对:核内表达的抗原定位用免疫荧光或者免疫酶标都可以。如果定位不正确,建议封闭和打孔合为一步,即在封闭液中添加0.5% TRITON-100,37度封闭2小时,加一抗后最好4度孵育过夜(16小时)。
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