材料与仪器
植物组织Trizol 氯仿 异丙醇 乙醇 DEPC处理过的水 液态N2 NaCl 柠檬酸钠转子-定子均化器 研钵和杵 圆锥形管
步骤
一、材料1. 缓冲液、溶液和试剂Trizol(Invitrogen)氯仿异丙醇乙醇，70%，用焦碳酸二乙酯（DEPC) 处理过的水配制DEPC 处理过的水、液态 N2NaCl,1.2mol/L柠檬酸钠,0.8mol/L2. 特殊设备转子-定子均化器（或相当的）研钵和杵，在 DEPC 处理过的水中洗涤，液氮中预冻50 ml 圆锥形管，例如 Falcon3. 细胞和组织合适的植物组织二、方法1. 液氮预冻过的研钵中研磨约 1g 植物组织，操作时使用足够的液氮淹没植物组织。将组织研磨成很细的粉末，这点很重要。2. 将粉末转移到 50 ml 圆锥形管中，管中已按每克组织 10 ml 的量加入 Trizol。3. 使用转子-定子均化器均质化组织 30s。4.4°C 下 1500 g 离心裂解产物 15 min 以移去残渣。5. 将上清液转移到一新管中。每毫升 Trizol 加 200ul 氯仿。6. 将管颠倒数次以混合。室温下温育 5 min。7.4°C 下 1500 g 离心 20 min。将上清液转移到一新的 50 ml 管中。8. 加 0.5 倍体积异丙酵和 0.5 倍体积的 0.8mol/L 柠檬酸钠、1.2mol/L 氯化钠溶例如，对 500ul 体积的液相而言，应加 250ul 异丙醇和 250ul 柠檬酸钠溶液。9 混合，室温下温育 1min。于-20°C 保存过夜可提高 RNA 产量。10.4°C 下 1500 g 离心 20 min。11. 移弃上清液，每毫升 Trizol加 lml70% 乙醇，以进行初步抽提。12.1500 g 离心 15 min。小心移弃上清液，避免扰动沉降物。将沉降物风干。13. 将 RNA 溶解于 DEPC 处理过的水中。lg 成熟叶组织的 RNA 产量可达 500ug。这个方案对含多酚化合物或树脂的植物组织可能不适用。对富含多酚、树脂或淀粉的提取困难的植物组织，推荐使用 ConcertPlantReagent(Invitrogen)。
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