简介
白喉抗毒素效价测定法（家兔皮肤试验法）是用不同剂量白喉抗毒素处理小鼠，后续观察小鼠生病或死亡情况，从而推断供试品效价的实验方法。
材料与仪器
实验试剂：
① 白喉抗毒素标准品；
② 硼酸盐缓冲盐水。
实验动物：
① 体重 2000~3000 g 的健康白皮肤实验家兔。
步骤
白喉抗毒素效价测定法（家兔皮肤试验法）的基本过程可分为如下几步：
A. 白喉抗毒素标准品溶液的制备。
a. 取中国食品药品检定研究院提供的白喉抗毒素标准品适量，稀释至每 1 mL 含 1/151U, 立即与毒等量混合后每 0.1 mL 注射量中含 1/3001U。
b. 白喉抗毒素标准品原倍液的一次吸取量应不低于 0.5 mL。
B. 白喉毒素溶液的制备。
a. 白喉毒素由中国食品药品检定研究院提供，可自备。
b. 试验用的毒素须以中国食品药品检定研究院提供的白喉抗毒素标准品准确标定其试验量（Lr/300），每 3 个月复检 1 次。
c. 毒素应保存于 2~8 ℃ 避光处，并加入甲苯或其他适宜防腐剂。
C. 稀释液。
a. 硼酸盐缓冲盐水配制，称取氯化钠 8.5 g，硼酸 4.5 g，四硼酸钠（10 分子结晶水）0.5 g。
b. 加注射用水溶解并稀释至 1000 mL，过滤，灭菌后 pH 应为 7.0~7.2。
D. 溶液混合。
a. 定量吸取稀释后的白喉抗毒素标准品溶液及不同稀释度的供试品溶液分别加入小试管中，每管加入等量的稀释毒素溶液，混合均匀。
b. 加塞，37 °C 结合 1 小时后，立即注射。
E. 动物选择。取体重 2000~3000 g 的健康白皮肤实验家兔。
F. 动物处置。
(1) 背部脱毛：试验前一天用适宜方法进行背部脱毛，凡皮肤有发炎或大斑点现象者不应使用。
(2) 注射：①每份供试品溶液注射 2 只家兔，每只家兔不能超过 4 份供试品溶液。②每稀释度注射 0.1 mL 于家兔皮内 (应在近背脊两侧)。③每只家兔至少应包括 3 个不同注射部位 (前、中、后) 的对照试验。
注意事项: 标准品溶液与供试品溶液不得用同一支注射器注射。
G. 观察试验家兔于注射后 48 小时及 72 小时各观察 1 次，并测量反应面积。
注意事项
A. 以 48~72 小时结果作最后判定。注射对照部位一般于 48~72 小时内轻度发红，其直径应为 10~14 mm。供试品的效价应以与多数对照的反应强度相同的最高稀释度判定之，反应强度不得超过对照。
B. 有下列情况之一者应予重试：(1) 对照反应不符合规定标准。(2) 供试品的稀释度过高或过低。(3) 反应不规则。
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