一、准备工作
1、实验器具与材料：
（1）移液枪：200ul、10ul
（2）吸头：200ul、20ul
（3）吸头台：放置200ul和20ul的吸头一个
（4）EP管1.5ml、100ul
2、实验器具的处理与准备
塑料制品：（包括吸头、EP管等）
送至高压3次，试验前将枪头放入吸头台。
3、试剂配制和准备：
（1） 双蒸水： 100ml盐水瓶内装40ml蒸馏水，送至高压，后分装到几个1。5mlEP管中，-20℃中保存备用。
（2） PCR中所需要的各种试剂
二、PCR时注意事项：
佩戴一次性手套，同时避免戴上的一次性的手套接触可疑污染物。
三、PCR步骤
1、准备100ul EP管
2、依次在管中加入：（50ul反应体系）
| ddH2O | 37.5ul | ×？ |
| 10mM dNTP | 1ul | ×？ |
| 10×PCR buffer | 5ul | ×？ |
| 25mM MgCl2 （加之前要摇匀） | 3ul | ×？ |
| 上游引物 | 1ul | ×？ |
| 下游引物 | 1ul | ×？ |
| 模板cDNA | 1ul |
3、稍离心
4、100℃沸水浴1分钟
5、趁热加入Tag酶0.5ul（冰上操作）
6、再加入50ul液体石蜡封闭
7、10000rmp离心1分钟
8、PCR条件
94℃ 1min
58℃ 50sec
72℃ 1min30sec
进行40个循环，然后72℃ 10min 完后4℃保温。
9、10000rmp离心5min
10、将下层水相转入新的0.65mlEP管中，－20℃保存。
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