基于动态等位基因特异性杂交法检测突变基因

简介

英文名:dynamic allele- specific hybridization, DASH

动态等位基因特异性杂交同样基于碱基发生错配时 DNA 熔解温度不同进行突变位点鉴定,检测熔解温度值的定量改变,因而能针对多种突变类型设计检测,实验条件温和。

原理

动态等位基因特异性杂交的基本原理是在碱基发生错配时 DNA 熔解温度不同,通过荧光探针标记进行突变位点检测。

材料与仪器

样本的基因组 DNA

步骤

1) 样本基因组 DNA 的提取

2) PCR 过程中使用生物素化引物,使得扩增得到的基因组片段可以与微球相连

3) 将产物与链亲和素柱接触,用 NaOH 洗涤去除未生物素化的链

4) 将等位基因特异性寡核苷酸加入到含有一旦结合双链 DNA 立即发荧光的分子中,在升温的过程中检测荧光强度,因而可得到 Tm 值,特异位点突变导致的错配会导致 Tm 的下降。

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