基本培养基的配制及细胞培养的条件

一、 培养基的特性——细胞生存的环境与条件

1、温度条件(37±0.5℃)

2、pH条件 (7.2~7.4)

3、气体条

4、水的质量(三蒸)

5、渗透压

6、营养条件

7、无菌条件

二、 培养基的分类

1、平衡盐液

2、天然培养基(小牛血清、胚胎液)

3、合成培养基(化学成分清楚)

三、 RPMI1640培养基的配制

1、RPMI1640 10g

2、丙酮酸钠 0.11g

3、Hepes(羟乙基哌碃乙硫磺酸)5.925g

4、NaHCO3 2g

5、三蒸水 1000ml

电磁搅拌,过滤出菌,并进行无菌实验

四、 过滤出菌

仪器:不锈钢正压滤器

材料:纤维素微孔虑膜 (0.22mm孔径)

装好后消毒

五、 完全培养基的配制

RPMI 1640培养液85ml

小牛血清 10 ml

谷氨酰氨 1ml

抗菌素(青、链霉素)1万单位 1ml

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