酵母遗传学方法7:随机孢子分析

随机孢子分析

1)孢子形成

1. 挑已形成孢子的二倍体单菌落接种在 YPD 平板上,尽可能把细胞涂薄一些,在 30 ℃下培养 12 ~ 16 小时,超过 16 小时将明显降低孢子的形成率。

2. 上午,用一个无菌壳板钉取相当一火柴头量的细胞,转到含有 2.5ml 产孢培养基试管中,在 25 ℃下旋转振荡培养。

3. 用光学显微镜检测孢子形成情况。要使 5 %以上的细胞形成孢子需花 2 ~ 10 天。

2)随机孢子

4. 取 1ml 形成孢子的培养物转到 15ml 的锥形聚苯乙烯离心管,用医用离心机离心 5 分钟沉淀细胞。

5. 彻底除去上清液,把细胞悬浮在 0.2ml 无菌水和 5 μ l β - 葡糖苷酸酶(约 500 个单位)。

6. 在 30 ℃条件下旋转振荡培养 1 小时。

7. 加 0.1ml (约 0.15 克)灭菌的 0.5mm 玻珠,在 30 ℃条件下旋转振荡培养 1 小时。

8. 加 1ml 无菌水。

9. 振荡 1 ~ 2 分钟,用光学显微镜检查子囊是否完全破裂。

10. 加 4ml 无菌水。

11. 用无菌水做 10 - 1 ~ 10 - 3 稀释度,在含有 60 μ g/ml 刀豆氨酸的 SC - arg 平板上涂 200 μ l 。

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