酵母蛋白质的抽提
此法抽提的酵母蛋白适用于 SDS 凝胶电泳和 Western 印迹分析。
1． 从 OD600 ＝ 2 的细胞培养物中抽提酵母蛋白质。培养物的一种简单制备方法是将细胞接种到 5ml YPD 中，过夜培养后获得指数培养物（ OD600 ＝ 0.5 ～ 2.0 ）。
2． 在水浴上把 OD600 ＝ 2 的细胞培养物转到含有 2ml 的 50mmol/L Tris-HCl(pH7.5) 、 10mmol/L 叠氮化钠溶液的 13mm 离心管中，用吊篮式医用离心机离心沉淀细胞。
3． 用 25 号针头吸出上清液，再用 30 μ l ESB 缓冲液悬浮细胞。
4． 快速转入微型离心管，在 100 ℃下保温 3 分钟，使蛋白酶失活之后，样品存放于－ 20 ℃。
5． 加入 0.1g 的 0.2mm 的玻珠，或装入玻珠直至液体刚好浸没，剧烈振荡混合 2 分钟。
6． 加入 70 μ l ESB 缓冲液，稍加振荡，置 100 ℃保温 1 分钟。
ESB 缓冲液（可在 4 ℃贮存数天）：
2 ％ SDS
80 mmol/L Tris-HCl (pH 6.8)
10% 甘油
1.5 ％ 二硫基苏糖醇（ DTT ）
0.1mg/ml 溴酚蓝
7 ．取 5 ～ 20 μ l 抽提液上样进行 SDS 凝胶电泳。
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