利用滤纸提取检测法筛选表达β半乳糖苷酶的酵母菌落

材料与仪器

包含lacZ融合基因的酵母菌株选择培养基平板 液氮 Z缓冲液 20 mg mL×-gal溶于二甲基甲酰胺30℃孵育箱 圆形硝酸纤维素滤膜 Whatman 3MM 滤纸

步骤

1)在含有适当选择培养基的培养平板上点接种或者划线接种酵母菌克隆，在30℃培养

直至生长到理想的大小（一般需要48 h)。

设置双份检测有助于提高结果的可靠性。

2)将一个圆形的硝酸纤维素滤膜置于平板上方，轻轻地压在平板的表面，使所有的菌落转移到膜上。这一步建议使用加强型硝酸纤维素滤膜并且要轻轻地操作，因为放在液氮里之后它们会变得非常脆。

3)小心地揭下滤膜，将其置于一装有液氮的浅盘子中，液氮能刚好覆盖一张滤膜即可。

4)使用宽压舌板之类的工具小心地将滤膜从液氮中取出，将滤膜置于干燥的Whatman 滤纸上，在室温解冻（<5min)。

5)将另一张Whatman滤纸剪成圆形，放在一个培养皿里。加入3〜5mL含有1 mg/mLλ-gal的Z缓冲液，使液体刚好能够浸透滤纸但不能淹没滤纸。把解冻的硝酸纤维素滤膜放在Whatman滤纸上，使缓冲液慢慢地被吸收到滤膜上。

如果Whatman滤纸被缓冲液淹没，会导致菌落扩散，使筛选的结果无法解释。

6)将培养皿放在30℃，温育几分钟至过夜，直到阳性菌落变为蓝色。

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