一、简介
诱变可通过测定抗刀豆氨酸突变型出现的频率的对照试验来监测。在最佳诱变条件下，抗刀豆氨酸的突变频率，诱变后应该是未诱变的100倍以上。一般取得特定类型的突变体的频率完全取决于所要寻找的突变的性质。
二、操作方法
酵母菌细胞的诱变实验
三、材料与仪器
酵母YPD 磷酸钠缓冲液 甲乙硫醚 刀豆氨酸 硫代硫酸钠试管 摇床 离心机 平板
步骤
1. 将过夜培养的待诱变酵母菌株转接于5 ml YPD培养基，于30℃继续培养。检查细胞密度，记录并调整到2×108细胞/ml。2. 转移1 ml 的菌悬液到无菌的离心管中。高速离心5~10 s，细胞重悬于1 ml 无菌水中，重复洗涤。再用1.5 ml 无菌的0.1 mol/l pH7.0的磷酸钠缓冲液重悬细胞。3. 在13 mm×100 mm 培养试管中先加入1 ml 缓冲液，然后加入0.7 ml 细胞悬液，剩余细胞在冰浴中保存留作对照。往试管中加入50 μl EMS，在旋涡混合器上振荡使分散均匀，在旋转摇床上于30℃温育1 h。4. 将0.2 ml 细胞悬液加入装有8 ml 无菌的5%硫代硫酸钠的培养试管中，灭活EMS，终止诱变。如果细胞在涂布于平板之前打算保存，即可在台式离心机上离心，再用等体积无菌水重悬细胞，4℃保存。5. 在2个刀豆氨酸平板上分别涂布0.1 ml 诱变细胞悬液，再在同样的刀豆氨酸平板上涂布0.1 ml 未诱变的细胞悬液作对照。于30℃培养直到长出菌落为止（大约需要2~4天），比较诱变后和未诱变的细胞在刀豆氨酸平板上长出的菌落数，计算出抗刀豆氨酸突变的相对水平。6. 用无菌水按1 ：1 000的比例稀释处理过的细胞，以期在铺平板后每个平板上长出的菌落数约100~200个，取0.1 ml 和0.2 ml 稀释的细胞涂布于2套YPD平板上，毎1套为10个平板，置于室温23℃培养3~4天，如果是进行营养缺陷型筛选，应将平板置于30℃恒温混匀培养。7. 从步骤6选择至少10个YPD平板，每个平板含100~200个菌落，然后将每个平板上的菌落影印到2个空白的YPD平板上。如果要筛选温度敏感株，那么可将平板分成2组，一组于37℃培养过夜，另一组于23℃培养过夜。一般来说，要允许影印平板中的一个平板在允许突变株生长的条件下培养，另一个平板则要求在突变型不能生长的条件下培养。8. 比较37℃和23℃平板，所有在37℃不能生长的菌落均应作为温度敏感突变的候选株。9. 重复检测一次，从23℃培养的YPD平板上挑出温度敏感的菌株，并将单一的菌落在空白YPD平板上划线。在毎个平板上，要加亲代株作对照，于23℃生长直到菌落形成（2~4天），在每个YPD平板上，可纯化6~8个温度敏感的酵母菌突变株。10. 单菌落形成后，将温度敏感候选株影印到2个YPD平板上，与第一次影印操作一样，其中一个平板在37℃培养1天，另一个平板于室温培养1天，记录两个平板上菌落的生长情况。11. 重新鉴定温度敏感候选株并永久保存经过鉴定的温度敏感株。
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