流式细胞术是一种强大的技术，用于测量和分析单个颗粒在溶液中通过光束时的物理特性。可以测量诸如相对大小和荧光等属性，而荧光标记的抗体则能够使细胞被检测出多种蛋白质和分子动态。流式细胞术能够对细胞群体进行快速的多参数分析，这在生物医学研究中非常有用。通过使用特定荧光标记的抗体，研究人员可以同时检测细胞表面的多个抗原，从而了解细胞的表型和功能。此外，流式细胞术还可以用于监测细胞内信号传导途径的活性，以及细胞周期的不同阶段。
复习：二抗格式
- 全分子IgG抗体：是常见的二抗形式，能够与一抗的Fc区结合。
- F(ab')2片段抗体：由IgG经蛋白酶处理得到，包含两个Fab臂，但没有Fc区。在染色组织或细胞时，由于缺乏Fc区，可以避免因细胞表面表达的Fc受体导致的非特异性结合背景。
- FabuLight - Fc特异性Fab片段抗体：通过木瓜蛋白酶消化IgG并去除Fc片段制成。这些单价Fab片段特异性针对一抗的Fc区，不会与一抗的抗原结合区发生相互作用。偶联的FabuLight 可用于在与实验样本孵育前对一抗进行标记，节省孵育和洗涤步骤，同时像F(ab')2片段一样，能够通过防止Fc受体结合来减少背景染色。
流式细胞术的荧光偶联物
Jackson ImmunoResearch提供多种荧光染料偶联的二抗，这些荧光染料涵盖从紫外到远红的整个光谱范围，可根据仪器的能力进行选择。包括Alexa Fluor、Brilliant Violet、Cyanine，以及三种大型明亮的荧光蛋白（R-PE、APC和PerCP），可设计出满足仪器能力和实验需求的流式细胞术染料组合。
实验对照
对照对于验证实验和解释结果至关重要。ChromPure 蛋白从非免疫动物的血清中纯化，是适当的实验对照。同种型对照是一种阴性对照，可用于估计抗体的非特异性结合。同种型对照是与实验中使用的抗体的宿主物种和类别相匹配的抗体，但不针对感兴趣的抗原。同种型对照应与特异性抗体一样，用相同的报告分子偶联。
间接流式细胞术
在流式细胞术中，直接法通常是指将荧光染料直接偶联到一抗上，而间接法则是使用荧光标记的二抗来识别未标记的一抗。间接法的优势在于可以通过二抗放大信号，从而提高检测的灵敏度，这在检测低丰度或弱表达的抗原时特别有用。图1中的数据清楚地展示了间接法在信号强度上的优势，这对于需要高灵敏度检测的实验来说是一个重要的考量因素。此外，间接法还允许使用同一二抗与多种一抗结合，增加了实验设计的灵活性。不过，间接法也可能带来更高的背景噪音，因此选择合适的二抗和对照对于获得准确结果至关重要。
直接和间接流式细胞术方法的比较
在用氯化铵裂解红细胞后，对人类外周血门控淋巴细胞进行CD3表达分析，使用了直接或间接流式细胞术。比较平均荧光强度显示，间接方法产生的信号更亮（22,973），相比于直接方法（8,985）。（实验在BD FACSCelesta上执行）。
产品举例：
| 货号 | 完整名称 | 货号 | 完整名称 |
| 112-475-042 | Anti-Mouse IgG (H+L), DyLight 405 | 112-128-502 | Anti-Mouse IgG (H+L), Biotin-SP |
| 112-155-042 | Anti-Mouse IgG (H+L), BV421 | 112-286-072 | Anti-Mouse IgG (H+L), Alexa Fluor 680 |
| 112-645-042 | Anti-Mouse IgG (H+L), Alexa Fluor 647 | 112-486-023 | Anti-Mouse IgG (H+L), Alexa Fluor 488 |
| 112-056-042 | Anti-Mouse IgG (H+L), FITC | 112-295-044 | Anti-Mouse IgG (H+L), HRP |
| 112-165-043 | Anti-Mouse IgG (H+L), PE | 112-166-044 | Anti-Mouse IgG (H+L), HRP |
| 112-165-143 | Anti-Mouse IgG (H+L), APC | 112-166-044 | Anti-Mouse IgG (H+L), HRP |
| 112-165-143 | Anti-Mouse IgG (H+L), APC-Cy7 | 112-265-066 | Anti-Mouse IgG (H+L), Alexa Fluor 680 |
| 112-295-143 | Anti-Mouse IgG (H+L), PerCP-Cy5.5 | 112-475-072 | Anti-Mouse IgG (H+L), DyLight? 405 |
| 112-385-143 | Anti-Mouse IgG (H+L), PE-Cy7 | 112-155-672 | Anti-Mouse IgG (H+L), BV421? |
| 112-885-143 | Anti-Mouse IgG (H+L), APC-eFluor 780 | 112-545-072 | Anti-Mouse IgG (H+L), Alexa Fluor 546 |
| 112-605-143 | Anti-Mouse IgG (H+L), APC-Cy7 | 112-165-072 | Anti-Mouse IgG (H+L), Alexa Fluor 546 |
| 112-655-167 | Anti-Mouse IgG (H+L), PE-Cy7 | 112-128-502 | Anti-Mouse IgG (H+L), Biotin-SP |
| 112-055-167 | Anti-Mouse IgG (H+L), FITC | 112-165-062 | Anti-Mouse IgG (H+L), Alexa Fluor 680 |
| 112-165-167 | Anti-Mouse IgG (H+L), APC | 112-165-062 | Anti-Mouse IgG (H+L), Alexa Fluor 680 |
| 112-165-175 | Anti-Mouse IgG (H+L), PE | 112-265-063 | Anti-Mouse IgG (H+L), Alexa Fluor 680 |
| 112-165-175 | Anti-Mouse IgG (H+L), PE-Cy5 | 112-605-071 | Anti-Mouse IgG (H+L), Alexa Fluor 711 |
| 112-165-175 | Anti-Mouse IgG (H+L), PE-Cy7 | 112-06-071 | Anti-Mouse IgG (H+L), Alexa Fluor 711 |
| 112-65-008 | Anti-Mouse IgG (H+L), Biotin-SP | 112-165-071 | Anti-Mouse IgG (H+L), APC-Cy7 |
| 112-655-008 | Anti-Mouse IgG (H+L), Biotin-SP | 112-06-071 | Anti-Mouse IgG (H+L), Alexa Fluor 711 |
| 112-095-008 | Anti-Mouse IgG (H+L), HRP | 112-585-008 | Anti-Mouse IgG (H+L), HRP |
| 112-295-008 | Anti-Mouse IgG (H+L), HRP | 112-295-008 | Anti-Mouse IgG (H+L), HRP |
Jackson ImmunoResearch 提供的二抗产品在流式细胞术中表现出色，它们的高特异性和低非特异性结合特性使得实验结果更加可靠。特别是，Jackson的FabuLight?二抗，由于其单价特性，可以更精确地标记一抗，减少背景染色，提高实验的信噪比。此外，Jackson的ChromPure?蛋白作为实验对照，可以有效地帮助研究人员评估抗体的特异性结合，从而确保实验数据的准确性。这些高质量的产品和对照使得Jackson ImmunoResearch成为流式细胞术研究中不可或缺的合作伙伴。
