免疫荧光(Immunofluorescence, IF)是一种技术,它允许在任何给定的组织或细胞类型中可视化多种成分。这种广泛的能力是通过特定抗体与荧光染料结合实现的,抗体能够特异性地识别目标分子,而荧光染料则使得这些分子在荧光显微镜下可见。免疫荧光技术在医学研究和临床诊断中有着广泛的应用,例如在癌症研究中,它可以用来识别和定量肿瘤微环境中的不同细胞类型,从而帮助理解肿瘤的免疫景观和制定治疗策略。
在免疫荧光技术中,二抗的选择对于实验的成功至关重要。Jackson ImmunoResearch 提供了超过3000种二抗,适用于包括免疫荧光在内的多种应用,如Western blot、共聚焦显微镜(免疫组织化学、免疫细胞化学和免疫荧光)、ELISA、流式细胞术和电子显微镜等。这些抗体具有广泛的物种和特异性选择,以及全IgG、F(ab')2和Fab片段形式,允许在多样化的实验条件下进行高度特异性的检测。此外,Jackson ImmunoResearch 的Alexa Fluor 594偶联抗体在可见光谱的深红区域提供明亮、光稳定且亲水性强的荧光,是免疫荧光检测的最佳选择。以下列出了较为常规的荧光染料的选择:
跨光谱的最亮信号
JIR 提供广泛的荧光偶联物,涵盖从蓝光到红外光发射的最常用激发光源和滤光片组合。
Alexa Fluor 荧光染料
Alexa Fluor 荧光染料被广泛认可为卓越的荧光染料,以其亮度和光稳定性受到尊重。它们具有高度的水溶性,并且在 pH 4 到 pH 10 的范围内都能保持荧光,使您能够产生精美的图像。正如 Jackson 的研究指出,Alexa Fluor 染料在多种实验条件下都能保持稳定的荧光强度,即使在长时间的光照下,其荧光衰减速度也远低于其他同类染料,这使得它们在长时间观察的实验中尤为适用。这种光稳定性对于需要长时间成像的细胞生物学研究,如活细胞成像,具有重要意义。
Brilliant Violet 染料
BV421 和 BV480 是聚合物链,可以被视为一系列光学片段的集合,每个片段都有吸收光和发出荧光信号的能力。这使得这些染料具有明亮的荧光信号,从而实现卓越的分辨率和灵敏度。Jackson 的实验数据表明,Brilliant Violet? 染料在复杂的生物样品中仍能保持高亮度,即使在高背景荧光的组织切片中,也能清晰地分辨出目标信号。这种高亮度和低背景荧光的特性,使得它们在多色流式细胞术和荧光显微镜成像中表现出色,能够有效减少信号重叠和背景干扰。
花青素染料(Cy?3 和 Cy?5)
花青素染料可以很好地承受用于将切片安装在非极性塑料安装介质中所需的严酷脱水和嵌入条件。与在水性介质中相比,花青素染料在非极性环境中更亮,这使得在这些条件下与其他染料相比,采集时间得以减少。Jackson 在其研究中提到,花青素染料在非极性环境中的荧光增强特性,使其在某些特殊的组织学应用中具有独特的优势,尤其是在需要将切片安装在特定介质中的情况下。这种特性使得花青素染料在免疫组织化学和原位杂交等实验中,能够提供更清晰的荧光信号,有助于提高实验的准确性和可靠性。
荧光蛋白 - 藻红蛋白(R-PE)、PerCP 和别藻蓝蛋白(APC)
藻红蛋白(R-PE)、PerCP 和别藻蓝蛋白(APC)可以被可见光谱范围内较宽范围的光激发,具有高度的水溶性,相对较低的等电点,并且缺乏可能具有粘性的碳水化合物。它们是流式细胞术中细胞表面标记的绝佳选择,因为它们相对较高的分子量可能限制了它们在需要良好穿透细胞和组织的程序中的使用。Jackson 的实验结果也证实了这些荧光蛋白在流式细胞术中的优异表现,它们的高荧光强度和特异性结合能力,使得细胞表面标记更加清晰,有助于提高流式细胞术的检测效率和准确性。这些荧光蛋白的特性使其在细胞表面标志物的检测和细胞分选等应用中表现出色,能够有效减少非特异性结合和背景荧光。
Fluorophore | Excitation Peak (nm) | Emission Peak (nm) |
DyLight 405 | 400 | 421 |
Brilliant Violet 421* | 407 | 421 |
Aminomethylcoumarin, AMCA | 350 | 450 |
Brilliant Violet 480* | 436 | 478 |
Alexa Fluor 488 | 493 | 519 |
Fluorescein, FITC/DTAF | 492 | 520 |
Indocarbocyanine, Cy3 | 550 | 570 |
R-Phycoerythrin, R-PE | many, 488 | 580 |
Alexa Fluor 555 | 552 | 572 |
Rhodamine Red-X, RRX | 570 | 590 |
Alexa Fluor 568 | 577 | 602 |
Alexa Fluor 594 | 591 | 614 |
Allophycocyanin, APC | many, 650 | 660 |
Alexa Fluor 647 | 651 | 667 |
Indocarbocyanine, Cy5 | 650 | 670 |
Peridinin-Chlorophyll-Protein, PerCP | many, 488 | 675 |
Alexa Fluor 680 | 684 | 702 |
Alexa Fluor 790 | 792 | 803 |
综上所述,Jackson ImmunoResearch 提供的高质量二抗产品,不仅适用于免疫荧光技术,还覆盖了多种生物学研究领域。这些抗体的多样性和特异性确保了实验的准确性和可靠性,为科研人员提供了强有力的工具。通过选择合适的二抗,研究人员可以更有效地进行生物标记和检测,推动科学发现和医学进步。Jackson ImmunoResearch 致力于不断优化产品,以满足不断变化的科研需求。