夏天,最怕听到“热”这个字!有没有人跟小编一样,一听,就热?
所幸,最近一节段还是炎夏来临前的雨季,全国范围内还是比较凉爽的,对于怕热的人生,再来一块清凉的“冰心”,才最爽!
可见温度对生活的影响有多大,炎炎夏日,空调开高一度和低一度,有时候后就是天(da)差(han)地(lin)别(li).
对于温度异常敏感的PCR实验,更是如此!
每次PCR实验都要到处找冰盒,铲冰…… 各种怕温度敏感的酶在小小的PCR小管里发生不该发生的story,比如非特异扩增,悄悄地合成引物二聚体等,最后P出来各种条带,我们就要cry了。
那么,如果我们使用了热启动DNA聚合酶,故事就不一样了。经过化学修饰的TaqDNA聚合酶,对温度“炒鸡”稳定,PCR加样再也不需要到处找冰盒铲冰,小心翼翼的忐忑了。HoT FIREPol®热启动DNA酶常温稳定一个月,只有温度达到95℃才会被激活。所以我们再也不必担心加样的过程以及升温之前,PCR就开始反应,合成不需要的片段。做到随意PCR 如吃瓜!
好啦,言归正传,吃瓜的同时,我们来点专业解释:
在传统的PCR反应中,反应体系各成分(Taq DNA聚合酶、dNTP 和引物等)均是一次加入并进入循环,在反应温度由室温(25℃)上升至高温(94~95℃)过程中,可能发生引物错配和二聚体的形成。引物与模板中一些非靶位点的错配和引物之间形成的二聚体,在Taq酶的作用下均可延伸,这些非特异性产物又可以在后面的PCR循环中继续扩增,使非特异性产物不断积累,同时,也消耗反应体系的各成分,最终PCR扩增的特异性产物大大减少。热启动PCR(hot start PCR)是指DNA聚合酶只有在样品温度至少超过70℃时才发挥作用的PCR。通过这种方式控制PCR反应的必须组分DNA聚合酶,直到反应混合物被加热到可以阻止非特异引导和引物聚合的温度后,再启动PCR达到有效扩增特异性PCR产物的目的。
热启动PCR循环是这样的,为了充分激活酶,比普通PCR增加了热激活步骤。
循环步骤 | 温度 | 时间 | 循环 |
起始热激活 | 95℃ | 12-15min | 1 |
变性 | 95℃ | 15-30s | 26-35 |
退货 | 50-68℃ | 30-60s | |
延伸 | 72℃ | 1-4min | |
终末延伸 | 72℃ | 5-10miin | 1 |
PCR的灵魂—热启动DNA聚合酶
与TaqDNA酶不同,热启动DNA聚合酶是经过化学修饰的Taq酶,常温操作时其没有活性,只有高温才能激活酶,可以避免低温或者常温操作时非特异性扩增以及引物二聚体的产生。这款Solis 热启动 FIREPol DNA 聚合酶更灵敏,特异性更强,可以常温操作,常温稳定1个月。同时,PCR产物可以无忧做下游实验DHPLC和TA克隆。
热启动PCR-第一款
热启动DNA聚合酶组合套装(货号# 01-02-xxxxx)
给你最大自由度的一款PCR组合,它的组分有:
1.热启动DNA 聚合酶
2.反应buffer1---10x 反应液B1(不含Mg2+和去污剂)
3.反应buffer2---10x 反应液B2 (不含Mg2+)
4.25 mM MgCl2
5.10x Solution S
细心的同学已经发现,为什么一般的PCR体系只有一个buffer,而这个却有两个?
小编为你解密啦!之所以包含两款Buffer 是为广大用户考虑的,如果你的样本不需要去污剂,或者需要自由调整Mg2+浓度,这款给你最大自由度 ,可以按照您实验需求调整方案。而这款套装的最大的宝藏是组分Solution S,常规PCR不需要它,但是如果你遇到扩增困难的模板,或者高GC含量模板,10x Solution S 就要登场啦,并且你可以根据需要调整它的工作浓度,1×,2×,3×.
漂亮的数据告诉你它有多好!
数据显示HoT FIREPol®热启动DNA酶可以很好的扩增基因组DNA片段
扩增人基因组DNA的4个片段:1,2为HoT FIREPol®DNA聚合酶;3,4为竞品A公司;5,6为竞品B公司。
如果您需要热启动PCR预混液,这里有多功能热启动PCR预混液,因为篇幅有限,这里给大家列表展示:
基于热启动酶的PCR类型 | 英文名称 | 产品特色 | MgCl2 浓度 | *扩增片段范围 | 货号 |
高GC含量PCR | HOT FIREPol® gC Master MIX |
ž 尤其适合>79%GC的DNA模板扩增 ž MgCl2和DMSO单独包装 ž 更灵活设计实验 ž 一管PCR预混液,减少操作步骤,避免加样误差 |
25 mM MgCl2 | 5kb | 04-33-xxxxx |
多重PCR | HOT FIREPol® MultiPlex Mix | ž 可以同时扩增多个目的片段 ž 一管PCR预混液,减少操作步骤,避免加样误差 |
10 mM | 5kb | 04-34-xxxxx |
HOT FIREPol® MultiPlex Mix (上样即用型) | 10 mM | 5kb | 04-36-xxxxx | ||
高保真PCR | HoT FIREPol® blend master mix | ž 精确度优化的PCR,5倍保真度(与Taq酶相比),适合高需求的PCR检测 ž 一管PCR预混液,减少操作,避免加样误差 |
• 7.5mM • 10mM • 12.5mM • 15mM |
5kb | 04-27-xxxxx |
HOT FIREPol® MultiPlex Mix blend master mix(上样即用型) | 5kb | 04-25-xxxxx | |||
在线客服 | ![]() |
![]() |
*扩增片段范围:可以扩增各种类型DNA模板的片段,如cDNA, λDNA,质粒DNA等,扩增片段<5kb; 以及多物种的基因组DNA (人、动物、植物等),扩增片段<3kb .
这些试剂盒有多好,性价比有多高呢? 一组漂亮的数据告诉你:
HOT FIREPol®高GC含量预混液在GC含量高达79%的模板上表现良好!
扩增多种高GC含量片段
使用高GC含量PCR预混液从人gDNA扩增出12种高GC的基因。 DNA模板和DMSO的终浓度分别为1 ng /μl和10%。
HOT FIREPol® 多重PCR 预混液进行4、8、14、18多重PCR检测, 表现敏感而特异!
多重PCR扩增
人类gDNA的不同基因在使用HOTFIREPol®MultiPlex Mix进行多重反应。扩增了122 bp到1340 bp的DNA片段,显示相似的高产量和高特异性,同时进行了4、8、14和18多重PCR检测。
HOT FIREPol®高保真PCR可以高度特异而准确的扩增多种长度DNA片段
当然还有优秀的参考文献:
- Pellerin J.l., et al., Theriogenology (2019)
- Ogola E. O., et al. Parasites and Vectors (2019)
- Bahram, M., et al. Nature (2018).
- Otsing, E., et al. Soil Biology and Biochemistry (2018).
- Mullett, M.S., et al. Forest Pathology (2018).
- Strobel, a., et al. Environmental Toxicology and Chemistry (2018).
- lange, M.K., et al. Veterinary Parasitology (2018).
看到这儿,您心动了吗?马上联系小艾吧!
或者扫描下方二维码,即可联系您的专属客服哦~
艾美捷科技有限公司,通过提供完整的产品和服务体系、便利的客户关系和供应链管理,为生命科学研究工作者提供整体打包方案。我们的企业的核心价值观:“激情、敬业、学习、创新、合作、卓越”。激发我们内在的创造力,提供有竞争力的生物医学产品和服务,持续为客户创造最大价值是我们的企业使命。我们的企业愿景是成为受人尊重、世界一流的生物医学产品及服务供应商。
作为一家具有尖端的技术实力、一流的经营管理水平和完善的市场销售体系的生物高科技企业,总部位于武汉光谷国家级高新技术开发区,服务面向全国。艾美捷科技是集进口试剂、实验室耗材销售、技术服务与合约开发为一体的专业化高科技公司,为用户提供最前沿的专业资讯、完备的产品、整合的解决方案,及优质的物流服务。为了更好的服务客户,公司组建了一支经验丰富的研发团队-艾美捷生物技术中心,进入研发生产阶段,将更优质的产品推荐给国内生物领域的同仁们!
艾美捷科技与国内外优秀的生物试剂供应商保持着密切的合作关系,目前已成为众多国际知名品牌的中国总代理或一级代理,主要包括:AmyJet、AAT Bioquest、Abnova、Agrisera、Biovision、Biosensis、开曼生物、Caisson Labs、Cytoskeleton、CytoNiChe、Epigentek、Equitech-Bio、Hycult Biotech、Jackson、LifeSensors、ProSpec、Norgen Biotek、Mabtech、Matreya、iRegene、StressMarq、ImmunoReagents、SouthernBiotech、Origene、US Biological、Solis BioDyne等,可以在第一时间为用户提供最前沿的专业资讯、完备的产品及物流服务。
三点:
企业使命:激发我们内在的创造力,提供有竞争力的生物医学产品和服务,持续为客户创造最大价值。
企业愿景:成为受人尊重、世界一流的生物医学产品及服务供应商。
艾美捷定位:通过提供完整的产品和服务体系、便利的客户关系和供应链,为生命科学研究工作者提供整体打包方案。
六观:
价值观:激情、敬业、学习、创新、合作、卓越。