骨髓细胞移植实验

材料与仪器

器材:

① 注射器

试剂:

① IMDM;

② 1x PBS;

③ 酸化抗生素水。

步骤

骨髓细胞移植实验的基本过程可分为如下几步:

(一)准备骨髓移植受体小鼠

A 受体小鼠在接受辐射 1 周前,要饲喂酸化并添加抗生素的灭菌水。

B 受体小鼠接受辐射后 2 周内要继续饲喂酸化并添加抗生素的灭菌水,然后才可以改喂酸化但不含抗生素的饮用水。

C 对 C57BL6/J 小鼠而言,辐射剂量是 10 Gy 的伽马射线,受体小鼠要在 4 小时内接受尾静脉骨髓移植手术。

(二)准备移植用供体骨髓细胞

A 收获供体小鼠股骨,保存在 RPM11640(2% FBS,10 U/mL 肝素+青霉素+链霉素)。

C 用注射器冲洗股骨骨髓腔,用灭菌的 40 μm 细胞滤器过滤骨髓细胞。

C 用无血清的 RPMI1640 冲洗细胞,4 ℃ 离心 5 分钟,转速 2000 r/mi。

D 用 25 mL 无血清 RPMI 重悬细胞,细胞计数。

E 无血清 RPMI1640 调整细胞浓度至 1x10 cells/mL。

F 对受体小鼠进行尾静脉注射骨髓细胞,每只小鼠注射 0.5 mL 细胞液,即 5x106细胞。

(三)酸化抗生素水制备

A 用 HCl 将水的 pH 调至 2.6,灭菌。

B 每升酸化水加 10 mL 新霉素(10 mg/mL)和 400 μL 硫酸多黏菌素 B(25 mg/mL),过滤灭菌。

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