骨髓间质干细胞的分离和培养

大鼠骨髓间质干细胞的分离和培养：取3－4周龄SD大鼠断颈处死，75％酒精浸泡5分钟，无菌条件下取双侧股骨，彻底清除附着其上的肌肉组织，去除两端骨骺，暴露骨髓腔，PBS液反复冲洗骨髓腔至骨髓腔变白，吹打离散细胞，将冲洗液收集于离心管中，1100r/min离心4min，弃去上清及脂肪，加入DMEM培养液6－7ml，重悬细胞种植于25cm2培养瓶中，37℃、5℅CO2饱和湿度下培养，3d后更换培养液，去除未贴壁细胞，以后每3d换液一次，待贴壁细胞达90％融合时，0.25%胰蛋白酶和％0.01依地酸消化贴壁细胞,然后加入等量培养液终止消化，吸管反复吹打，转移至无菌离心管中，1000r/min离心10min,弃去上清夜，然后用培养液重悬细胞，按1：2传代，随着换液和传代细胞逐渐纯化。

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