固定全细胞的 PI 染色

简介

是一种可对 DNA 染色的细胞核染色试剂,常用于细胞凋亡检测。

原理

碘化丙啶(Propidium Iodide, PI)是一种核酸染料 (红色),它不能透过完整的细胞膜,但凋亡中晚期的细胞和坏死细胞由于细胞膜通透性的增加,PI 能够透过细胞膜而使细胞核染红。用 PI 单一染色观测培养细胞,只能表示细胞的坏死情况,而不是凋亡(当然晚期凋亡PI亦可着色)。

用途

如果只是想知道细胞的死亡情况,而不是仔细区分坏死或凋亡,那么 PI 单一染色也可以。但是如果您一定要认定细胞的凋亡,那么 PI 单一染色不够。

材料与仪器

细胞PBS 冷乙醇 PI 溶液锥形管

步骤

1. 分离细胞并移至 15 ml 的锥形管中。检查有单个细胞悬浮,1000 g 离心 5 分钟,弃上清。2. 用不含 Ca 或 Mg 的 PBS 将细胞洗 2 次,计数细胞总数,记在管山。3. 用约 500 μl 的 PBS 重悬细胞。4. 加 5 ml 冷乙醇,4℃ 固定过夜。5. 取 5X106细胞放入 15 ml 锥形管中,1000 g 离心,弃乙醇。6. 悬搅沉淀,用 5 ml PBS+1% BSA 或小牛血清洗 2 次。7. 用含 1% BSA 或 1% 小牛血清的 800 μl PBS 重悬细胞沉淀。8. 加 100 μl 10X PI 溶液。9. 加入 100 μl 煮沸过的 RNA 酶 A,37℃ 孵育 30 分钟。10. 用流式细胞计量术分析固定的样品。

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