简介
是一种可对 DNA 染色的细胞核染色试剂,常用于细胞凋亡检测。
原理
碘化丙啶(Propidium Iodide, PI)是一种核酸染料 (红色),它不能透过完整的细胞膜,但凋亡中晚期的细胞和坏死细胞由于细胞膜通透性的增加,PI 能够透过细胞膜而使细胞核染红。用 PI 单一染色观测培养细胞,只能表示细胞的坏死情况,而不是凋亡(当然晚期凋亡PI亦可着色)。
用途
如果只是想知道细胞的死亡情况,而不是仔细区分坏死或凋亡,那么 PI 单一染色也可以。但是如果您一定要认定细胞的凋亡,那么 PI 单一染色不够。
材料与仪器
细胞PBS 冷乙醇 PI 溶液锥形管
步骤
1. 分离细胞并移至 15 ml 的锥形管中。检查有单个细胞悬浮,1000 g 离心 5 分钟,弃上清。2. 用不含 Ca 或 Mg 的 PBS 将细胞洗 2 次,计数细胞总数,记在管山。3. 用约 500 μl 的 PBS 重悬细胞。4. 加 5 ml 冷乙醇,4℃ 固定过夜。5. 取 5X106细胞放入 15 ml 锥形管中,1000 g 离心,弃乙醇。6. 悬搅沉淀,用 5 ml PBS+1% BSA 或小牛血清洗 2 次。7. 用含 1% BSA 或 1% 小牛血清的 800 μl PBS 重悬细胞沉淀。8. 加 100 μl 10X PI 溶液。9. 加入 100 μl 煮沸过的 RNA 酶 A,37℃ 孵育 30 分钟。10. 用流式细胞计量术分析固定的样品。
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