材料与仪器
甜菜碱 dNTP 溶液 二甲基亚砜 四甲基砜 Taq 酶和酶缓冲引物PCR 仪
步骤
一、材料1. 试剂甜菜碱（Sigma 公司）dNTP 溶液（含四种 dNTP, 每种 25 mmol/L)二甲基亚砜（DMSO)(Sigma 公司）四甲基砜（Sigma 公司）2. 酶和酶缓冲液Taq 酶Taq 酶缓冲液（Taq 酶制造商提供）3. 核酸和寡核苷酸人类基因组 DNA，每个反应中 20ng，hRF3(hGSPTl) 引物：hRF3f CCGC/CTCT/GTCG/TCGT/CGChRF3r CCGC/GCTG/AGGT/TCTC/CCKlotho 外显子 la 引物：klolaf CTCG/CAGG/TAAT/TATT/GCCAGklolar GATG/GACG/CACC/CTTGKlotho 外显子 lc 引物：klolcf GTGC/AGCC/CGTG/GTCACklolcr GACT/CAGT/TCCC/ACAC/TTC4. 设备PCR 仪5. 其他琼脂糖凝肢电泳所需设备和试剂二、方法1. 在灭菌的 0.2 ml 的 PCR 管中加入下列试剂。基因组 DNA 20ng引物（每种） 15pmolTaq 酶 0.5U10 x buffer 2.5uldNTP 溶液（含四种 dNTP) 250umol/L加 H20 到 25ul根据处理条件的不同，分别包含 DMSO(5%)、甜菜碱（lmol/L)、甜菜碱（2mol/L)、甜菜碱（lmol/L) 和 DMS0(5%)、甜菜碱（2mol/L) 和 DMS0(5%)、四甲基砜(0.4mol/L)，对照不加任何其他试剂。2. 采用下列程序 A 或 B 运行 30 个循环。
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