辅助方案固定

一、简介

透射电镜样品的制备方法很多。其中滴液法，或在滴液法基础上发展出来的其他类似方法如直接贴印法、喷雾法等主要被用于观察病毒粒子细菌的形态及生物大分子等。由于生物样品散射电子的能力很低，所以通常还须采用重金属盐染色或金属喷镀等方法来增加样品的反差，提高观察效果。负染色法由于操作简单，目前在进行透射电镜生物样品制片时比较常用。

本实验将主要介绍采用滴液法结合负染色技术观察细菌的形态。

二、操作方法

辅助方案固定

三、原理

为了保持菌体的原有形状，常用戊二醛、甲醛、锇酸蒸气等试剂小心固定后再进行染色。

四、材料与仪器

菌悬液固定液（如 pH 7.2 0.15％的戊二醛磷酸缓冲液）戊二醛无菌水 2％的磷钨酸钠水溶液冰箱无菌毛细吸管无菌滤纸

五、步骤

1. 将用无菌水制备好的菌悬液经过滤，然后向滤液中加几滴固定液（如 pH 7.2，0.15％的戊二醛磷酸缓冲液）。

2. 经这样预先稍加固定后，离心，收集菌体，制成菌悬液，

3. 再加几滴新鲜的戊二醛，在室温或 4 ℃ 冰箱内固定过夜。

4. 次日离心，收集菌体，再用无菌水制成菌悬液，并调整细胞浓度为 108～109个/毫升。