EMSA实验过程膜没有一直处于湿润状态怎么办?

在EMSA实验中,保持膜处于潮湿的状态非常重要,因为一旦膜干燥,核酸和蛋白质即使结合了也难以形成准确的电泳迁移带。以下是关于如何保持EMSA实验过程中膜处于潮湿状态的建议:

1. 在制备探针、裂解细胞等操作之前,先将仪器、坩埚、电泳室等与0.5X TBE预冷却并抹干表面,确保不会有多余的水滴污染试样。

2. 在准备反应混合物时保持迅速操作。每次加入组分后立即轻轻摇动样品管,将探针尽快构建复合物并防止在混合物与蛋白质溶液之间产生空气缺陷。

3. 经过电泳后,打开电泳槽盖子,用吸水纸轻轻拍干之前被液体封盖的探针上覆盖物的外侧,将多余的液滴从膜表面吸走。

4. 如果您长时间无法进行下一个步骤,请在相对潮湿环境下用湿滴头盖好烧杯或样品管中的反应液,并密封冷藏。在实验结束后,将带有反应混合物的膜立即转移到湿滤纸上并加盖保鲜膜,避免其完全干燥。

综上所述,在EMSA实验过程中尽可能将探针/样品置于潮湿环境内,以防止膜的干燥。这可以通过快速操作、用纸巾轻轻拍干膜表面等方式进行有效地实现。

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