材料与仪器
动物肝脏 肾脏 肌肉组织 水产品 牛奶聚丙烯 乙二胺四乙酸二钠 甲醇-水 甲醇-乙酸乙酯 乙腈 三氟乙酸聚丙烯离心管 固相萃取柱 高效液相色谱 串联质谱仪
步骤
1.提取动物肝脏、肾脏、肌肉组织、水产品：称取均质试样5g（精确到0.01g），置于50mL聚丙烯离心管中，分别用约20mL、20mL、1OmL、0.1mol/LEDTA-Mcllvaine缓冲溶液（0.1mol/L。称取60.5g乙二胺四乙酸二钠放入1625mLMcllvaine缓冲溶液中，使其溶解，摇匀）低温超声提取三次，3000r/min，5min离心（温度低于15℃），合并上清液（注意控制总提取液的体积不超过50mL），并定容至50mL，混合，5000r/min，离心10min（温度低于15℃），过滤，待净化。牛奶：称取混匀试样5g（精确到0.01g），置于50mL聚丙烯离心管中，用0.1mol/LEDTA-Mcllvaine缓冲溶液溶解并定容至50mL，旋涡混合1min，低温超声10min，冷却至4℃，5000r/min，离心10min（温度低于15℃），过滤，待净化。2.净化准确吸取10mL提取液以1滴/s的速度过WatersOasisHLB（60mg，3mL）固相萃取柱，待上清液完全流出后，依次用5mL水和5mL甲醇-水（5+95）淋洗，弃去全部流出液。减压抽干5min，最后用10mL甲醇-乙酸乙酯（10+90）洗脱。将洗脱液吹氮浓缩至干（温度小于30℃），用1.0mL标准稀释液溶解残渣，低温超声5min，过0.45um滤膜，供高效液相色谱/串联质谱仪测定。3.5HPLC测定条件色谱柱：Inertsi1C8-3，5um，150mm×2.1mm；流动相：甲醇，乙腈，0.01mol/L三氟乙酸，洗脱梯度见表3-11（柱平衡时间5min）；
流速：1.5mL/min；柱温：30℃；进样量：30uL。4.HPLC-MS/MS测定条件色谱柱：InertsilC8-3，50m，150mm × 2.1mm；流速：0.3mL/min；柱温：30℃；进样量：300L；流动相：甲醇+0.01mol/L三氟乙酸。离子化模式：ESI+；质谱分辨率：单位分辨率；雾化气（NEB）：6.0L/min；气帘气（CUR）：10.0 L/min；喷雾电压（IS）：4500V；去溶剂温度（TEM）：500℃；去溶剂气流：700L/min；碰撞气（CAD）：6.0 L/min（氮气）。
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