1．挑取-20℃保存的DH5а单菌落接种于3ml的LB液体培养基中，37℃160r/min培养过夜（此为一级培养）
2．将一级培养菌液接2%的量接种于5ml新鲜LB液体培养基中，37℃，200r/min,培养2.5~3.0h，使细菌进入对数生长期。（OD600=0.6左右）
3．将二级培养产物分装到1.5ml离心管，冰浴30min.
4. 4000r/min离心10min,弃上清。
5．加750ul0.1mol/l冷CaCL2液悬浮菌体。
6．4000r/min，弃上清，加入80ul预冷的CaCL2（0.1mol/l）重悬菌体。
7. 制备好的感受态课冰浴过夜（不课超过48ml）成直接用于转化或加无菌甘油（15~20%）―70℃长期保存。
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