蛋白酶的测定实验-偶氮酪蛋白测定法

原理

酪蛋白的敏感性鉴定可以通过这个实验得到很大程度的改善。含氮的基团与酪蛋白的共价键被蛋白水解时切断,用 TCA 上清液测定它们的颜色变化。

材料与仪器

蛋白酶溶液磷酸钾 偶氮酪蛋白(磺胺偶氮酪蛋白) 三氯乙酸分光光度计

步骤

0.5 ml 偶氮酪蛋白溶液

0.2 ml 蛋白酶溶液

25℃ 时培养 30 min 后,加 0.2 ml 10% 三氯乙酸停止反应,离心 5 min。

于 340 nm 处测上清液的吸收值,1U 是指 1 h 内,能使吸收值变化 1 的酶量。

常见问题

试剂:

0.1 mol/L 磷酸钾,pH 8.0

0.2% 偶氮酪蛋白(磺胺偶氮酪蛋白)溶于 0.1 mol/L 磷酸钾溶液,pH 8.0

10% 三氯乙酸(TCA,质量浓度)

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