常见的细胞增殖的方法主要包括:MTT法、WST-1法、CCK-8法,这些主要是基于检细胞活性,从而反映出总体的增殖效果,却无法检测到单个的增殖细胞。公认的最精确的检测细胞增殖的方法是直接检测细胞中DNA的合成,此前最常用的就是BrdU法,但是方法则需要DNA变性(如酸变性、热变性或者用DNase消化)去暴露BrdU,从而与BrdU抗体结合,整个实验影响因素较多,稳定性比较差。
Abbkine针对这一应用难点,创新开发了基于EdU掺入和后续的点击反应的EdU法:
产品名称 | 货号 | 荧光特性 |
Cell Proliferation EdU Image Kit (Green Fluorescence) 细胞增殖成像分析试剂盒(EdU法)(绿色荧光) |
KTA2030 | AbFluor 488 Ex/Em = 501/525 nm |
Cell Proliferation EdU Image Kit (Orange Fluorescence) 细胞增殖成像分析试剂盒(EdU法)(橘红色荧光) |
KTA2031 | AbFluor 545 Ex/Em = 546/565 nm |
原理:EdU(5-溴-2-脱氧尿嘧啶)试剂盒是一种嘧啶类似物,在DNA合成过程中替代胸苷掺入到新合成的DNA中另一方面,EdU上的乙炔基能与荧光标记的小分子叠氮化物探针(如AbFluor 488 azid,AbFluor 545 azide等)通过一价铜离子的催化发生共价反应,形成稳定的三唑环,该反应非常迅速,被称作点击反应(Click reaction)(30分钟完成)。
点击反应 Click reactin
试剂盒组分: | 试剂盒优势: |
• EdU (10mM) • AbFluor 488和545 叠氮化物 • 10×反应缓冲液 • 含铜试剂 • 还原剂 |
• 无须抗体。 • 无变性步骤,保持细胞形态和DNA完整性。 • 简单,可靠,省事的创新方法。 • 专利的AbFluor 488和545 azide具有良好的光稳定性与抗淬灭性。 • 针对荧光显微镜进行优化。 |
结果展示:
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KTA2030成像:Hela细胞(绿色) | KTA2031成像:Hela细胞(红色) |
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