材料与仪器
牛肝脏 牛肌肉乙腈 正己烷 氮气 三乙胺离心 C8SPE柱 针筒滤膜 色谱柱
步骤
1.提取与净化称取匀浆的牛肝脏或肌肉2.5g，置于50mL离心管中，加入8mL乙腈，润动0.5min，2500r/min离心5min，取上清液。残留组织用8mL乙腈重复提取一次，合并两次的上清液于500mL的离心管中，加30mL纯水-三乙胺（30+0.045），过C8SPE柱（500mg，3mL），用20mL乙腈-水-三乙胺（40+60+0.1）淋洗，吹干；再用3mL正己烷淋洗，吹干；用2mL乙腈洗脱，收集。取4mL纯水和6uL三乙胺加至乙腈洗脱液中。过C8SPE柱（500mg，10mL），用10mL乙腈-水-三乙胺（30+70+0.1）淋洗，吹干，再用8mL正己烷淋洗，吹干；最后用2mL乙腈洗脱，吹干，收集洗脱液于5mL刻度试管内，50℃氮气吹干，用0.5mL乙腈定容，过0.45 um针筒滤膜，进HPLC-MS/MS分析。2.液谱-质谱串联条件色谱仪：Waters2690；流动相：乙腈-水-甲酸（95+5+0.1）；流速：0.2mL/min；色谱柱：C18柱，150mm，2.1mm，3um；柱温：（20 ± 2）℃；进样量：1O0L；质谱仪：电喷雾源（ESI）；毛细管电压：3.2kV；锥孔电压：70V；源温：120℃；雾化气：300℃；倍增电压：650V；碰撞气：氩气。
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