Calcein-AM是一种用于活细胞荧光标记的细胞染色试剂，通过增强Calcein的疏水性，它能够轻松穿透活细胞膜。一旦进入细胞质，酯酶会将Calcein-AM水解为Calcein，使其留在细胞内并发出强绿色荧光。与BCECF-AM和Carboxy-fluorescein diacetate等类似试剂相比，Calcein-AM是最适合作为活细胞荧光探针的选择，因为它具有较低的细胞毒性。Calcein的激发波长为490nm，发射波长为515nm。
相比之下，作为核染色剂的PI无法穿透活细胞膜，它通过死细胞膜的无序区域进入细胞核，并嵌入细胞的DNA双螺旋结构，产生红色荧光。因此，PI只能用于死细胞染色。它的激发波长为488nm和545nm，发射波长为617nm。
由于Calcein和PI-DNA都可被490nm激发，因此可用荧光显微镜同时观察活细胞和死细胞。用545nm激发，仅可观察到死细胞。根据以上特点，Calcein AM和PI经常被结合用来作为活细胞和死细胞的双重染色。
今天就给大家带来一款基于Calcein AM和PI的活死细胞双染试剂盒(B-CHK103)，本染色方法适用于荧光显微镜、荧光酶标仪等微孔板荧光扫描设备、流式细胞仪或其他的荧光设备。本染色方法适用于大多数真核细胞，包括贴壁细胞和某些组织样本，但不包括细菌和酵母样本。
需要注意的是Calcein AM/PI双染有效染色的前提是相应的细胞模型的活力变化是指酶活性变化和质膜完整性变化这些物理和生化特性，不影响这些细胞特性的细胞毒性事件可能不能使用此方法进行准确评估。
不同检测平台的建议步骤：
荧光显微镜检测：
- 准备样本细胞。
- 用PBS洗涤细胞2～3次。
- 用100～150μL染色工作液A至盖玻片将细胞样品覆盖(或重悬)。
- 在室温或37℃避光孵育20～45分钟。
- 用PBS洗涤细胞。
- 用100～150μL染色工作液B至盖玻片将细胞覆盖(或重悬)。
- 在室温或37℃避光孵育10～45分钟。
- 用PBS洗涤细胞。
- 用荧光显微镜检测结果。最大激发为490nm，最大发射波长分别为515nm和617nm。
流式细胞仪检测：
- 收集细胞：可以用胰酶-EDTA等消化细胞，制备成细胞悬液。
- 用PBS洗涤细胞两次。
- 制备1mL细胞悬浮液，浓度为0.1至5×106细胞/mL。细胞可以在无血清培养基或其他缓冲液中重悬。
- 在细胞中加入适量Calcein-AM溶液和适量PI母液，混匀。
- 在室温或37℃避光孵育15～30分钟。
- 尽快用流式细胞仪检测结果。
荧光酶标仪检测：
- 在微孔板中准备细胞样本孔以及对照孔。
- 用PBS洗涤细胞2～3次。
- 加入200μL染色工作液。
- 在室温或37℃避光孵育15～45分钟.
- 用PBS洗涤细胞。
- 加入适量PBS。
- 用荧光酶标仪/荧光光度计检测结果。最大激发波为490nm，最大发射波长为525nm和617nm。
相关产品推荐：
| 货号 | 名称 | 规格 |
| B-CHK103 | Calcein-AM/PI, Live/Dead Cell Double Staining Kit | 500T |
Biogradetech生命科学和医药研发行业关键原料与试剂的领先供应商：Biogradetech成立于2015年，总部位于美国加利福尼亚州，早期以产品技术研发服务起家，逐步发展了广泛的产品线，并将其商业化销售，包括蛋白质、抗体、酶、培养基、试剂盒和仪器。适用于细胞生物学、蛋白质组学、分子生物学、免疫学、微生物学、诊断学、生物化学、神经科学、血液分析和高通量药物筛选等领域。
