在进行哺乳动物细胞总RNA分离时，细胞裂解是关键的起始步骤，以下将分别介绍单层细胞和悬浮培养细胞或组织单细胞悬液的裂解方法。
单层细胞的裂解
冲洗细胞
首先吸出培养液，用7ml经冰预冷的无钙镁离子磷酸缓冲盐溶液（PBS）冲洗培养皿内的单层细胞，此操作重复一次。为保持低温，可将平板置于冰上，或放在铝板上再将铝板置于冰盘上，直至所有单层细胞冲洗完毕。
加入RNA提取缓冲液
对于直径为90mm的培养皿，加入0.5ml RNA提取缓冲液，并使其均匀覆盖整个平板表面。RNA提取缓冲液的成分包括：0.14mol/L NaCl、1.5mmol/L MgCl₂、10mmol/L Tris.Cl（pH8.6）、0.5％NP - 40、1mmol/L二硫苏糖醇（DTT）以及100单位/ml胎盘RNA酶抑制剂或20mmol/L氧钒核糖核苷复合物。
加入蛋白酶消化缓冲液并混匀
接着加入0.5ml蛋白酶消化缓冲液，使用刮棒将粘稠状裂解物混匀，并刮至平板边缘。蛋白酶消化缓冲液的成分有：0.2mol/L Tris.Cl（pH8.0）、25mmol/L EDTA（pH8.0）、0.3mol/L NaCl和2％ SDS。
剪切DNA
用装有21号针头的皮下注射器抽吸细胞裂解物，然后注入聚丙烯管内，重复3 - 4次以实现DNA的剪切。
蛋白酶K消化
添加蛋白酶K使其终浓度达到200μg/ml，充分混匀后，将样品置于37℃温育30分钟。蛋白酶K通常以20mg/ml的贮存液形式保存。
悬浮培养的细胞或组织单细胞悬液的裂解
收集与洗涤细胞
在4℃条件下，以2000g离心5分钟收集细胞。用10倍体积经冰预冷的无钙镁离子磷酸缓冲液重悬细胞沉淀，洗涤细胞3次。每次洗涤时，使用大口径吸管轻轻吹打细胞沉淀，确保细胞彻底分散。
重悬细胞
估计细胞沉淀的体积，用10 - 20倍体积的RNA提取缓冲液重悬细胞。
加入蛋白酶消化缓冲液并剪切DNA
加入与RNA提取缓冲液相同体积的蛋白酶消化缓冲液，用振荡器迅速混匀。同样使用装有21号针头的皮下注射器抽吸细胞裂解物并注入聚丙烯管内，重复3 - 4次进行DNA剪切。
蛋白酶K消化
添加蛋白酶K至终浓度为200μg/ml，充分混匀后，于37℃温育30分钟。蛋白酶K以20mg/ml的贮存液形式保存。
通过以上详细的操作步骤，能够有效地对哺乳动物细胞进行裂解，为后续总RNA的分离奠定基础。在操作过程中，要严格遵循各步骤的要求，确保细胞裂解的效果和RNA的质量。
