编码 DNA 结合蛋白的 cDNA 克隆的检测、纯化和鉴定-用盐酸胍进行干燥膜的变性/复性循环

材料与仪器

HEPES结合缓冲液

步骤

1)按基本方案步骤1〜15进行。

2)将平皿在4℃冷却10 min。用针扎孔标记各膜的位置。小心地揭起膜,室温下在空气中瞭干15 min。

3)将膜浸于HEPES结合缓冲液/6 mol/L盐酸狐中,4℃轻轻摇动温育10 min。在新 鲜的HEPES结合缓冲液/6 mol/L盐酸胍中重复1次。

4)将膜浸于HEPES结合缓冲液/3 mol/L盐酸胍(每10张膜50 mL)中,4℃ 5 min。 重复4次。每次用HEPES缓冲液及浓度较前次减半的盐酸胍进行漂洗。

5)将膜浸于HEPES缓冲液(50 mL/10张膜)中,4℃ 5 min。用新鲜缓冲液重复洗1次。

6)在BLOTTO中温育封闭。

7)进行滤膜筛选。

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