按细胞比重分离B细胞

细胞比重分离B细胞

1.将2~3ml含3×107纯化的B细胞(B细胞>90%)的细胞悬液加到3ml Percoll溶液(比重1.074)上,水平离心1000×g 20分钟。

2.吸去无细胞上清液,交界面的低密度B细胞和大部分Percoll溶液。由于此时细胞沉淀非常松散,需留下约0.2ml Percoll溶液以防吸去了沉淀细胞。轻敲离心管,用留下的液体悬浮高密度B细胞。

3.用洗涤液分别洗涤低密度B细胞和高密度B细胞两次,每次离心500×g 10分钟。最后,测定细胞数和细胞活力,用1~2ml含5%小牛血清的洗涤液将细胞配成适当浓度。

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