细胞渗透性钙离子指示剂 · 高灵敏度 · 低毒性
Calbryte 520 AM 是AAT Bioquest公司开发的一种细胞渗透性荧光钙离子（Ca2+）指示剂，货号为 20650。该产品主要用于实时监测活细胞内的钙离子浓度动态变化，具有高灵敏度、低毒性以及与多种荧光探针兼容的特点。
·主要用途：实时监测活细胞内钙离子浓度的动态变化
·适用领域：心血管研究、神经科学、肿瘤学、免疫学等
化学性质与工作原理
化学结构：
Calbryte 520 AM 为乙酰氧基甲酯（AM）衍生物，可通过被动扩散进入细胞。细胞内酯酶水解 AM 基团后，释放出游离的 Calbryte 520 荧光团，与 Ca?? 结合后荧光强度显著增强。
光谱特性：
1. 激发波长（λEx）：488 nm（与蓝光激光兼容）
2. 发射波长（λEm）：515–540 nm（绿色荧光范围）
3. 信号增强：与 Ca?? 结合时荧光信号可提升超过 100 倍，信噪比（SNR）高
亲和力特点：
Calbryte 520 对 Ca?? 的亲和力较低（Kd 约为 1–2 μM），适合检测快速、高幅度的钙瞬变，避免高亲和力染料（如 Fura-2）的饱和问题。
核心优势：
? 长时程稳定性：相较于 Fluo-4 AM 等传统染料，Calbryte 520 AM 在细胞内保留时间长达 24 小时，无需添加有机阴离子转运抑制剂（如 probenecid）。
? 多通道兼容性：其光谱特性使其可与红色荧光探针（如 R-CEPIA1SR，用于肌质网钙成像）同时使用，实现双通道钙信号监测。
? 高灵敏度与低背景：水解后的荧光团与 Ca2+结合时产生明亮的荧光信号，背景干扰小，适用于活细胞动态成像。
应用场景与实验案例
1. 心血管研究
心肌细胞钙动力学
用于人诱导多能干细胞分化心肌细胞（hiPSC-CMs）的胞质钙浓度监测，结合 R-CEPIA1SR 探针同步检测肌质网钙释放，研究心律失常机制（如儿茶酚胺敏感性多形性室速，CPVT）。
钙瞬变与动作电位同步记录
与膜电位探针 FluoVolt 联用，实现钙信号（Calbryte 520）与动作电位（FluoVolt）的双通道光学映射（100–1000 fps）。
2. 神经科学
神经元光热刺激研究
在 Ti3C2Tx MXene 材料介导的神经刺激实验中，Calbryte 520 AM 用于实时监测背根神经节（DRG）神经元在光热刺激下的钙内流，验证神经兴奋性。
钙信号与凋亡关联研究
在巨噬细胞中，通过钙成像分析炎症或药物处理后的钙响应。
3. 肿瘤与免疫学
肿瘤细胞钙通量检测
用于评估电磁场（如 5 mT 低频磁场）对肿瘤细胞内钙浓度的影响，揭示其抑制肿瘤生长的机制。
免疫细胞激活分析
在骨髓中性粒细胞（BMNs）中，监测 PAF（血小板活化因子）刺激下的钙信号动态，研究药物（如人参皂苷 Rg5）的调控作用。
4. 骨与组织工程
成骨细胞钙响应
在电磁治疗（EMTT）研究中，Calbryte 520 AM 用于检测骨祖细胞（hOBs）内钙浓度的升高，验证电场促进骨矿化的机制。
实验操作指南
1. 染料配制：将 Calbryte 520 AM 溶于含 0.04% Pluronic F-127 的缓冲液（如 HBSS 或 KRP-HEPES），终浓度通常为 5 μM。
2. 孵育条件：37°C 避光孵育 30–60 分钟，随后室温平衡 15–30 分钟以促进酯酶水解。
3. 洗涤与成像：用缓冲液洗涤 3 次后，在荧光显微镜或微孔板读数仪（激发/发射：490/525 nm）中观察信号。
注意事项
·避免长时间光照，防止光漂白。
·实验设计中需设置阴性对照（如未染色细胞）和阳性刺激（如离子霉素）以验证染料响应。
总结
Calbryte 520 AM 凭借其长时程稳定性、低背景噪声和广泛兼容性，成为活细胞钙成像的首选工具之一。无论是心血管疾病机制研究、神经兴奋性调控，还是肿瘤治疗新策略开发，该产品均展现出强大的应用潜力。欢迎垂询，AAT Bioquest中国区总代理，艾美捷科技！
