材料与仪器
小鼠或鸡的整个胚胎、组织或外植体4%(m V)琼脂糖 氰基丙烯酸盐黏合剂(如Superglue) l00 mmol L磷酸钠盐缓冲液 pH 8.0振动切片机(如VT 1000S; Leica)
步骤
1)固定和洗涤组织。
2)将组织放置在100 mL烧杯中,用吸管轻柔吸取大部分的洗涤缓冲液。在37〜40℃加入足够的4%中等强度的琼脂糖覆盖组织(让烧杯倾向于组织这边)。旋动烧杯混匀并使充分覆盖组织。
3)室温将烧杯放置成45°角直到琼脂糖变硬(约10 min)。
4)用一刀片调整琼脂糖块使之成方形,每边留出2〜3 mm。
5)用氰基丙烯酸盐粘合剂在合适的方向(如冠状切面)粘住琼脂糖块,使之粘到振动切 片机的标本支持机托盘上。将该托盘放进振动切片机,给整个槽装满100 mmol/L的 磷酸钠盐缓冲液,pH 8.0。
6)切片(细节参考振动切片机手册)。小心地从振动切片机槽内移走切片,放 入β-半乳糖苷酶洗涤缓冲液直到准备染色。进行组织染色。
7)观察和摄影染色的厚切片
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