β-半乳糖苷酶活性的整体封片免疫组化检测实验-准备大组织的厚切片进行β-半乳糖苷酶染色

材料与仪器

小鼠或鸡的整个胚胎、组织或外植体4%(m V)琼脂糖 氰基丙烯酸盐黏合剂(如Superglue) l00 mmol L磷酸钠盐缓冲液 pH 8.0振动切片机(如VT 1000S; Leica)

步骤

1)固定和洗涤组织。

2)将组织放置在100 mL烧杯中,用吸管轻柔吸取大部分的洗涤缓冲液。在37〜40℃加入足够的4%中等强度的琼脂糖覆盖组织(让烧杯倾向于组织这边)。旋动烧杯混匀并使充分覆盖组织。

3)室温将烧杯放置成45°角直到琼脂糖变硬(约10 min)。

4)用一刀片调整琼脂糖块使之成方形,每边留出2〜3 mm。

5)用氰基丙烯酸盐粘合剂在合适的方向(如冠状切面)粘住琼脂糖块,使之粘到振动切 片机的标本支持机托盘上。将该托盘放进振动切片机,给整个槽装满100 mmol/L的 磷酸钠盐缓冲液,pH 8.0。

6)切片(细节参考振动切片机手册)。小心地从振动切片机槽内移走切片,放 入β-半乳糖苷酶洗涤缓冲液直到准备染色。进行组织染色。

7)观察和摄影染色的厚切片

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