小 GTP 酶的 Ras 超家族由 150 多个成员组成，根据它们的序列同源性，它们分为几个亚家族，如 Rho、Ras、Ran、Rab、Arf 和 Rem/Rad 家族。这组小 GTP 酶充当二进制开关，在 GDP 结合的非活性状态和 GTP 结合的活性状态之间循环。这种转换的调节蛋白包括鸟嘌呤核苷酸交换因子 （GEF）、GTP 酶激活蛋白 （GAP） 和鸟嘌呤核苷酸解离抑制剂 （GDI）。GEF 催化 GDP 与 GTP 的交换，以响应细胞外信号产生小 GTP 酶的活性状态。为了促进交换，GEF 必须与 GDP 结合的 GTP 酶结合，破坏 GDP-GTP 酶复合物的稳定性，然后稳定无核苷酸的反应中间体。由于 GTP 与 GDP 的细胞内比率高，释放的 GDP 被 GTP 取代，导致 GEF 从复合物中释放并激活 GTP 酶。许多 GEF 蛋白已被鉴定为致癌基因，并与癌症等人类疾病有关。
有趣的是，GEF 蛋白的表达是组织或细胞类型特异性的，为癌症治疗提供了治疗潜力。最近开发的鸟嘌呤核苷酸荧光类似物大大提高了定义 GEF 实时交换反应的技术能力，包括动力学和热力学特性，从而消除了对传统放射性标记方法的需求。这种基于荧光的分析利用了鸟嘌呤核苷酸结合和未结合荧光类似物之间的光谱差异，从而能够监测小 GTP 酶的核苷酸交换。一旦与 GTP 酶结合，荧光团的发射强度就会急剧增加。因此，在小 GTP 酶和 GEF 存在下荧光强度的增强将反映已知或未知蛋白质的相应 GEF 活性。
Cytoskeleton Inc. 开发了一种基于 N-MAR-GTP 荧光团的 Rho-GEF 检测，适用于 96 孔和 384 孔格式。该检测可应用于多种研究目的，例如表征 GEF 和以高通量筛选形式鉴定 GEF 抑制剂。该试剂盒包含人 Cdc42、Rac1 和 RhoA 蛋白以及 Dbs 的 GEF 结构域，作为 Cdc42 和 RhoA 的阳性对照 GEF。Dbs 显示 Rac1 的 GEF 活性极低。有趣的是，据报道，人类 Dbs 可以在基于 FRET 的测定中激活 Rac1。
| 产品名称 | 货号 | 规格 |
| GEF 转化活性检测试剂盒
RhoGEF exchange assay |
BK100 | 60-300 assays |
产品用途包括
- 测定未表征的 GEF 的活性和 GTP 酶特异性。
- 小 GTP 酶及其相关 GEF 的生化表征。
- 检查不同辅因子或蛋白质结构域对 GEF 活性的调节。
- 筛选 GEF 或 GTP 酶的突变蛋白的活性和底物特异性。
- 以 HTS（高通量筛选）形式鉴定 GEF 抑制剂。请咨询此试剂盒中大量使用任何试剂的大幅折扣
GEF 转化活性检测试剂盒内容：该试剂盒包含足够的材料，可用于 60 次 96 孔规格的检测或 300 次 384 孔规格的检测。包括以下组件：
- Exchange Buffer
- His 标记的 Cdc42 蛋白（货号 # CD01）
- His 标记的 Rac1 蛋白（货号 # RC01）
- His 标记的 RhoA 蛋白（货号 # RH01）
- His 标记的 hDbs 蛋白（货号 # GE01）
- 384 孔黑色半面积圆底板
- 96 孔黑色半面积平底板
Dbs对Cdc42、RhoA和Rac1的交换活性以96孔和384孔的形式测量（图1和2）
图 1.Cdc42、RhoA 和 Rac1 交换测定
图 2.Dbs 在 96 孔半区域板中交换 Cdc42、RhoA 和 Rac1 的活性。
