在生物科学和医学研究领域，抗体标记已成为一项重要且常规的操作。标记物的种类繁多，从荧光染料等视觉标记到生物素等半抗原分子，可用于增强免疫复合物和蛋白-蛋白相互作用的可见性，或用于蛋白质的分离与纯化。选择哪种标记物，取决于抗体的下游应用。荧光标记主要用于细胞成像、流式细胞术、荧光印迹和免疫荧光应用；酶标记（如辣根过氧化物酶和碱性磷酸酶）常用于印迹、ELISA和免疫组化应用；生物素等半抗原标记则是一种更灵活的标记选项，可用于蛋白质分离、纯化以及上述所有应用。
AAT Bioquest提供了一系列全面的抗体和蛋白标记试剂盒，这些试剂盒专为新手科学家设计，操作简单，无需太多实践经验。
抗体标记试剂盒概览:
表1. 抗体标记试剂盒对比:
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项目 |
ReadiLink试剂盒 |
ReadiLink xtra试剂盒 |
Buccutite试剂盒 |
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每次反应标记的抗体量 |
50 ug |
50 ug |
25 ug、50 ug或1 mg |
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标记化学 |
通过胺反应性染料靶向自由胺基 |
通过胺反应性染料靶向自由胺基 |
使用两个专有连接子促进蛋白-蛋白偶联 |
|
可用标记物 |
iFluor染料、mFluor染料、Alexa Fluor等效AF染料、FITC、Cy3、Cy5、Cy7、生物素 |
iFluor染料、Alexa Fluor等效AF染料、FITC、Cy3、Cy5、Cy7 |
PE、APC、串联染料、HRP、AP |
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标记物与抗体之间的键类型 |
共价键 |
共价键 |
共价键 |
|
是否兼容BSA或其他稳定剂 |
否 |
是 |
否 |
|
是否需要纯化 |
否 |
否 |
否 |
|
偶联所需时间 |
1小时 |
1小时 |
2小时 |
|
手动操作时间 |
约10分钟 |
约10分钟 |
约15分钟 |
|
批次间差异 |
最小 |
最小 |
最小 |
|
应用 |
成像、流式细胞术、免疫荧光、WB |
成像、流式细胞术、免疫荧光、WB |
流式细胞术、免疫荧光、免疫组化、WB、ELISA |
一．ReadiLink快速抗体标记试剂盒:
AAT Bioquest的ReadiLink快速抗体标记试剂盒为研究人员提供了一种快速便捷的方法，用于将微小体积的抗体与我们的优质iFluor染料、mFluor染料或其他标记物进行标记。ReadiLink试剂盒的独特化学性质使研究人员能够在无需纯化步骤的情况下轻松标记并回收100%的抗体。由于ReadiLink偶联物是共价标记的，因此它们适合长期储存。它们适用于包括荧光显微镜、多色成像、多参数流式细胞术、原位检测、免疫组化、荧光原位杂交、ELISA等在内的多种应用。
ReadiLink快速抗体标记试剂盒的关键特点:
1可标记单克隆抗体、多克隆抗体或其他蛋白
2快速简便的两步标记协议，无需化学或偶联经验
3适用于标记100 ?g抗体（两次单独的50 ?g抗体标记反应）
4100%抗体回收，**无需**对产品进行纯化
5偶联物1小时内即可使用，手动操作时间仅需约10分钟
6可选择iFluor染料、mFluor染料、Alexa Fluor等效XFD染料、FITC、Cy3、Cy5、Cy7、BSA、KLH或生物素;
7避免使用任何含胺缓冲液（如Tris或甘氨酸）
8必须在标记前去除稳定蛋白（如BSA或明胶）；若需使用兼容BSA的抗体标记试剂盒，请选择ReadiLink xtra快速抗体标记试剂盒
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|
|
ReadiLink抗体标记工作流程 |
ReadiLink快速抗体标记试剂盒利用胺反应性标记物制备共价标记的偶联物。这些反应性标记物选择性地靶向并结合到抗体上的自由胺基，如赖氨酸残基。要标记您的抗体，将抗体溶液（浓度约为1 mg/mL）与ReadiLink反应缓冲液混合，将混合物加入预配方标记物的小瓶中，并孵育30至60分钟。最后，将TQ-Dyed猝灭缓冲液加入到您的混合物中并充分混合。这一步是关键，因为它消除了背景干扰以及柱纯化步骤。孵育10分钟后，您的偶联物即可使用。
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流式细胞术分析人PBMC细胞。使用ReadiLink快速iFluor488抗体标记试剂盒（货号1255）或Lightning-Link快速Alexa Fluor488标记的抗人CD4抗体。使用ACEA NovoCyte流式细胞仪在FITC通道监测荧光信号。 |
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标记试剂盒 |
CD4（SK3）-偶联物 |
染色指数 |
|
ReadiLink试剂盒 |
CD4-iFluor488偶联物 |
43 |
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Lightning-Link试剂盒 |
CD4-Alexa Fluor488偶联物 |
26 |
表2. ReadiLink快速抗体标记试剂盒选择指南
|
荧光 |
等效替代 |
Ex/Em (nm) |
成像 |
流式 |
货号 |
|
mFluor Violet 420 |
Cascade Blue |
398/411 |
- |
Yes |
1105 |
|
iFluor 350 |
AMCA, Alexa Fluor 350 |
345/442 |
Yes |
- |
1220 |
|
mFluor Violet 450 |
Pacific Blue |
403/454 |
- |
Yes |
1100 |
|
mFluor Violet 510 |
- |
414/508 |
- |
Yes |
1110 |
|
iFluor 488 |
FITC, Alexa Fluor 488 |
491/514 |
Yes |
Yes |
1255 |
|
FITC |
- |
494/520 |
Yes |
Yes |
1299 |
|
mFluor Violet 540 |
Pacific Orange |
405/537 |
- |
Yes |
1114 |
|
Cy3 |
- |
555/565 |
Yes |
- |
1290 |
|
iFluor 555 |
Cy3, Alexa Fluor 555 |
552/567 |
Yes |
- |
1227 |
|
mFluor Blue 570 |
R-PE |
553/570 |
- |
Yes |
1120 |
|
iFluor 594 |
Texas Red, Alexa Fluor 594 |
592/614 |
Yes |
- |
1230 |
|
mFluor Green 620 |
- |
522/617 |
- |
Yes |
1123 |
|
iFluor 633 |
Cy5, Alexa Fluor 633 |
638/655 |
Yes |
Yes |
1260 |
|
Cy5 |
- |
644/665 |
Yes |
Yes |
1292 |
|
iFluor 647 |
Cy5, Alexa Fluor 647 |
654/674 |
Yes |
Yes |
1235 |
|
mFluor Red 700 |
APC-Alexa Fluor 700 Tandem |
657/700 |
Yes |
1130 |
|
|
iFluor 680 |
Cy5.5, Alexa Fluor 680, IRDye 700 |
682/701 |
Yes |
Yes |
1240 |
|
iFluor 700 |
Alexa Fluor 700 |
693/713 |
Yes |
Yes |
1245 |
|
Cy7 |
- |
749/776 |
Yes |
- |
1294 |
|
iFluor 750 |
Cy7, Alexa Fluor 750 |
753/779 |
Yes |
- |
1250 |
|
mFluor Red 780 |
APC-Alexa Fluor 750 Tandem |
629/780 |
- |
Yes |
1131 |
|
iFluor 790 |
IRDye 800, Alexa Fluor 790 |
782/811 |
Yes |
- |
1265 |
二．兼容BSA的ReadiLink xtra快速抗体标记试剂盒：
ReadiLink xtra快速抗体标记试剂盒具有BSA兼容性，将标记一抗的便利性提升到了一个新的水平。利用优化的标记协议和特别配方的标记物小瓶，ReadiLink xtra试剂盒能够在存在常见缓冲液添加剂和稳定蛋白的情况下，快速且可重复地标记微克量的一抗。只需两个简单的步骤，无需柱纯化，即可共价标记适用于任何基于免疫的应用的抗体。
ReadiLink xtra快速抗体标记试剂盒的关键特点:
1与BSA和其他稳定蛋白兼容
2可标记单克隆抗体、多克隆抗体或其他蛋白
3标记100 ?g抗体（两次单独的50 ?g抗体标记反应）
4100%抗体回收，**无需**对产品进行纯化
5偶联物1小时内即可使用，手动操作时间仅需约10分钟
6可选择iFluor染料、mFluor染料、Alexa Fluor等效XFD染料、FITC、Cy3、Cy5或Cy7
表3. ReadiLink xtra Rapid 抗体标记试剂盒
|
产品名称 |
Ex (nm) |
Em (nm) |
规格 |
货号 |
|
ReadiLink xtra Rapid iFluor 350 Antibody Labeling Kit |
344 |
448 |
2 Labelings |
1950 |
|
ReadiLink xtra Rapid iFluor 488 Antibody Labeling Kit |
491 |
516 |
2 Labelings |
|
|
ReadiLink xtra Rapid XFD488 Antibody Labeling Kit |
499 |
520 |
2 Labelings |
|
|
ReadiLink xtra Rapid FITC Antibody Labeling Kit |
491 |
516 |
2 Labelings |
|
|
ReadiLink xtra Rapid iFluor 555 Antibody Labeling Kit |
556 |
569 |
2 Labelings |
|
|
ReadiLink xtra Rapid XFD555 Antibody Labeling Kit |
553 |
568 |
2 Labelings |
|
|
ReadiLink xtra Rapid iFluor 594 Antibody Labeling Kit |
587 |
603 |
2 Labelings |
|
|
ReadiLink xtra Rapid XFD594 Antibody Labeling Kit |
590 |
618 |
2 Labelings |
|
|
ReadiLink xtra Rapid iFluor 647 Antibody Labeling Kit |
654 |
669 |
2 Labelings |
|
|
ReadiLink xtra Rapid XFD647 Antibody Labeling Kit |
650 |
671 |
2 Labelings |
|
|
ReadiLink xtra Rapid iFluor 750 Antibody Labeling Kit |
759 |
777 |
2 Labelings |
|
|
ReadiLink xtra Rapid XFD750 Antibody Labeling Kit |
752 |
776 |
2 Labelings |
三．Buccutite蛋白质到蛋白质标记试剂盒:
Buccutite交联技术提供了一种无故障的方法，可以用辣根过氧化物酶（HRP）、碱性磷酸酶（AP）或藻胆蛋白共价标记蛋白质和抗体。与传统的蛋白质-蛋白质偶联技术（如SMCC化学标记法）相比，Buccutite偶联明显更稳健，要求更低。这些试剂盒允许在不到两小时的时间内对微克量的抗体进行最佳标记（每次标记反应仅需25?g），无需纯化，产率为100%。使用Buccutite标记试剂盒，常规制备共价标记的偶联物，这些偶联物能够承受典型免疫测定（如ELISA、IHC和Western blot）或流式细胞术应用中通常需要的严格洗涤技术。
Buccutite快速抗体标记试剂盒的主要特点:
1标记25?g至1mg抗体;
2标签的选择包括HRP、AP、藻红蛋白（PE）、别藻蓝蛋白（APC）、PerCP、PE串联染料和APC串联染料;
3标记时间少于2小时，无需纯化;
4100%抗体回收率;
|
|
|
人PBMC细胞的流式细胞分析：用Buccutite快速PE抗体标记试剂盒（目录号1310）或Lightning LinkPE制备的抗人CD4抗体。使用FITC通道中的ACEA-NovoCyte流式细胞仪监测荧光信号。 |
表 4. Buccutite Rapid 抗体标记试剂盒
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产品名称 |
Ex (nm) |
Em (nm) |
规格 |
货号 |
|
Buccutite Rapid Protein Crosslinking Kit *Microscale Optimized for Crosslinking 100 ug Antibody Per Reaction* |
- |
- |
2 Labelings |
1315 |
|
Buccutite Peroxidase (HRP) Antibody Conjugation Kit *Optimized for Labeling 1 mg Protein* |
- |
- |
1 Kit |
5504 |
|
Buccutite Peroxidase (HRP) Antibody Conjugation Kit *Optimized for Labeling 100 ug Protein* |
- |
- |
1 Kit |
5503 |
|
Buccutite Peroxidase (HRP) Antibody Conjugation Kit *Optimized for Labeling 25 ug Protein* |
- |
- |
2 Labelings |
5505 |
|
Buccutite Rapid PE Antibody Labeling Kit *Microscale Optimized for Labeling 100 ug Antibody Per Reaction* |
565 |
575 |
2 Labelings |
1310 |
|
Buccutite Rapid PE Antibody Labeling Kit *Microscale Optimized for Labeling 25 ug Antibody Per Reaction* |
565 |
575 |
2 Labelings |
1312 |
|
Buccutite Rapid PE-Texas Red Tandem Antibody Labeling Kit *Microscale Optimized for Labeling 100 ug Antibody Per Reaction* |
565 |
600 |
2 Labelings |
1318 |
|
Buccutite Rapid PE-Texas Red Tandem Antibody Labeling Kit *Microscale Optimized for Labeling 25 ug Antibody Per Reaction* |
565 |
600 |
2 Labelings |
1343 |
|
Buccutite Rapid PE-Cy5 Tandem Antibody Labeling Kit *Microscale Optimized for Labeling 100 ug Antibody Per Reaction* |
565 |
674 |
2 Labelings |
1322 |
|
Buccutite Rapid PE-Cy5 Tandem Antibody Labeling Kit *Microscale Optimized for Labeling 25 ug Antibody Per Reaction* |
565 |
674 |
2 Labelings |
1340 |
|
Buccutite Rapid PE-Cy5.5 Tandem Antibody Labeling Kit *Microscale Optimized for Labeling 100 ug Antibody Per Reaction* |
565 |
700 |
2 Labelings |
1316 |
|
Buccutite Rapid PE-Cy5.5 Tandem Antibody Labeling Kit *Microscale Optimized for Labeling 25 ug Antibody Per Reaction* |
565 |
700 |
2 Labelings |
1341 |
|
Buccutite Rapid PE-Cy7 Tandem Antibody Labeling Kit *Microscale Optimized for Labeling 100 ug Antibody Per Reaction* |
565 |
780 |
2 Labelings |
1317 |
|
Buccutite Rapid PE-Cy7 Tandem Antibody Labeling Kit *Microscale Optimized for Labeling 25 ug Antibody Per Reaction* |
565 |
780 |
2 Labelings |
1342 |
|
Buccutite Rapid PerCP Antibody Labeling Kit *Microscale Optimized for Labeling 100 ug Antibody Per Reaction* |
482 |
677 |
2 Labelings |
1325 |
|
Buccutite Rapid PerCP Antibody Labeling Kit *Microscale Optimized for Labeling 25 ug Antibody Per Reaction* |
482 |
677 |
2 Labelings |
1353 |
|
Buccutite Rapid APC Antibody Labeling Kit *Microscale Optimized for Labeling 100 ug Antibody Per Reaction* |
651 |
665 |
2 Labelings |
1311 |
|
Buccutite Rapid APC Antibody Labeling Kit *Microscale Optimized for Labeling 25 ug Antibody Per Reaction* |
651 |
665 |
2 Labelings |
1313 |
|
Buccutite Rapid APC-Cy5.5 Tandem Antibody Labeling Kit *Microscale Optimized for Labeling 100 ug Antibody Per Reaction* |
651 |
700 |
2 Labelings |
1320 |
|
Buccutite Rapid APC-Cy5.5 Tandem Antibody Labeling Kit *Microscale Optimized for Labeling 25 ug Antibody Per Reaction* |
651 |
700 |
2 Labelings |
1350 |
|
Buccutite Rapid APC-iFluor 700 Tandem Antibody Labeling Kit *Microscale Optimized for Labeling 100 ug Antibody Per Reaction* |
651 |
713 |
2 Labelings |
1319 |
|
Buccutite Rapid APC-iFluor 700 Tandem Antibody Labeling Kit *Microscale Optimized for Labeling 25 ug Antibody Per Reaction* |
651 |
713 |
2 Labelings |
1347 |
|
Buccutite Rapid APC-Cy7 Tandem Antibody Labeling Kit *Microscale Optimized for Labeling 100 ug Antibody Per Reaction* |
651 |
780 |
2 Labelings |
1321 |
|
Buccutite Rapid APC-Cy7 Tandem Antibody Labeling Kit *Microscale Optimized for Labeling 25 ug Antibody Per Reaction* |
651 |
780 |
2 Labelings |
1351 |
